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분야
hwp1. 서론
2. 본론
1)hTPO 클로닝
1-1)mRNA 분리와 cDNA 합성
1-2)Human TPO 클로닝
2)library 구축
2-1)Library 제작 방법
2-2)Overlapping PCR mutagensis에 의한 hTPO anlogue cDNA 제조
3)strong expression vector의 구축
4)Cell culture and transfection
4-1)CHO K1 cell에서 TPO mutants의 발현
5)screening & select
5-1)FACS로 측정
5-2)select
3. 결론
새로운 TPO의 활성과 그 기대효과
4. 참고문헌
1. 서론
면역체계의 발생과 항상성 유지는 면역 기관에 존재하는 세포(면역세포)들의 성장과 분화에 의해서 이루어지는데, 중간체(mediator)인 cytokine이라는 단백질이 관여하고 있다. 이들 cytokine역시 그들의 수용체를 가지는데, 이들을 통칭하여 cytokine 수용체라고 한다. cytokine수용체는 Single membrane-spanning 단백질로 extracellular domain 에 Trp - Ser - Xaa - Trp - Ser (WSXWS)의 고유한 염기서열을 가지고 있다. 이들 수용체는 구조적인 차이에 의해서 두 부류로 분류하고 있는데, cytokine 수용체 Ⅰ와 cytokine 수용체 Ⅱ가 그들이다. 이 두 부류의 특징적인 차이점은 cytokine수용체Ⅰ는 세포질 내의 Jak kinase라는 단백질 kinase를 매개로 하여 신호를 전달하고 있는데 반해 cytokine수용체 Ⅱ는 수용체 자체에 tyrosine kinase부위를 가지고 있다. Cytokine 수용체Ⅰ에는 interleukin-2 수용체, IL-3 수용체, IL-4 수용체, IL-5 수용체, IL-6 수용체, IL-7 수용체, IL-9 수용체, IL-11 수용체, IL-11 수용체, IL-12 수용체, ertythropoietin 수용체, granulocyte colony stimulating factor 수용체, thrombopoietin 수용체, prolactin 수용체, growth hormone 수용체 등이 있으며, 신호 전이 과정을 살펴보면 수용체의 dimerization이 일어나게 된다. 앞에서 언급한 바와 같이 이들 자신은 자체의 tyrosine kinase의 부위가 없기 때문에, 세포질에 존재하는 야누스 kinase(Janus kinases)를 이용한다. 야누스 kinase에는 Jak 1 kinase, Jak 2 kinase, Jak3 kinase, 및 Tyk 2 kinase가 있다. 다시 말해, 수용체에 리간드가 결합하면 이들 수용체의 dimerization이 유도되고 세포질내의 야누스 kinase가 단백질 - 단백질 상호 작용에 의해 신호 전이가 일어난다. 이들 cytokine 수용체는 수용체 tyrosine kinase와 마찬가지로 특별한 부위를 가지는 세포질에 존재하는 단백질을 이용하는데, SH 부위나 SPH 부위를 가지는 중간체를 이용하는 수용체 tyrosine kinase와는 달리, 이 경우 STAT 부위를 가지고 있는 단백질이 신호전이에 관여하고 있다.
조혈 성장 인자는 조혈 전구 세포의 증식과 분화를 조절하는 당 단백질 호르몬이다. Cytokine 수용체 가계 중 대표적인 조혈 성장 호르몬으로 TPO, EPO, G-CSF가 있다.
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신규 재조합 트롬보포이에틴을 이용한 혈소판 감소증 치료제의 개발 과학기술부
한국생명공학연구조합/(주)대웅제약 생명과학연구소
유전자 재조합 human Thrombopoietin(TPO)의 생리활성 분석 /김봉순
트롬보포이에틴의 아미노산 변이에 따른 활성 변화 / 정현주
Production of human erythropoietun(EPO)using new strong expression vector 송혜순
