[분자생물학] DNA sub-cloning & Polymerase Chain Reaction(PCR).

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2010.01.27
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소개글

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 Date
 Experiment – Digestion of DNA with Restriction Enzyme
 Experiment – Agarose Gel Electrophoresis
 Experiment – Gel Purification

 Date
 Experiment - Ligation reaction
 Experiment – Preparing competent bacteria & Heat shock transformation

 Date
 Subjects
 Experiment – Selection of Tranformants

 Date
 Experiment – Protocol for plasmid preparation
 Experiment – 제한효소에 의한 유전자의 분리
 Experiment – 전기영동에 의한 유전자의 분리

 Date
 Subjects

본문내용

1. DNA를 자른다는 것은 nucleotide를 연결하고 있는 phosphodiester bond를 끊어여러 DNA 단편을 만들어 내는 것을 의미한다. 이 때, 이런 역할을 하는 효소를nuclease라고 하며 그 종류로는 바깥 쪽을 절단하는 효소인 exonuclease와 안쪽을 절단하는 endonuclease가 있다.
2. 대표적 endonuclease인 제한효소(restriction enzyme)는 DNA에 존재하는 특정한 염기서열을 인식하고 인식한 서열부위 또는 그 근처에 존재하는 특정부위를 절단한다. 이러한 제한효소는 박테리아와 같은 세균 안에서 발견되기도 한다. 바이러스와 같은 외부 인자가 세포 내로 침입할 때 이를 인식하고 이 외부 DNA를 절단, 제거하기 위한 방어기전으로 사용된다. 이 때, 자신의 DNA가 제한효소에 인식되어 잘리는 것을 막기 위해 자기 DNA 절단부위의 염기를 methylation 시켜서 보호하고 있다. 이러한 제한효소는 총 3종류로 나눌 수가 있지만 실험실에서는 대부분이 type Ⅱ 가 사용된다.
3. Type II restriction enzyme: 거의 모든 실험에 쓰이는 제한효소로 인식부위와 절단부위가 모두 특이성이 있다.
-4~6개의 염기서열 인식 → DNA 상에 나타나는 인식부위의 빈도가 달라짐.
즉, 6개의 염기서열을 인식한다면 이론상 46 = 4096 base pair 마다 한번씩 출현하게 되는 것이다.
-제한효소가 인식할 수 있는 부위: Palindrome

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