[분자생물학실험] Western blotting(스트레스로 인한 단백질 발현의 변화관찰)
![[분자생물학실험] Western blotting(스트레스로 인한 단백질 발현의 변화관찰)-1](http://images.happyhaksul.com/thumb/498/497116-0001.gif)
![[분자생물학실험] Western blotting(스트레스로 인한 단백질 발현의 변화관찰)-2](http://images.happyhaksul.com/thumb/498/497116-0002.gif)
![[분자생물학실험] Western blotting(스트레스로 인한 단백질 발현의 변화관찰)-3](http://images.happyhaksul.com/thumb/498/497116-0003.gif)
![[분자생물학실험] Western blotting(스트레스로 인한 단백질 발현의 변화관찰)-4](http://images.happyhaksul.com/thumb/498/497116-0004.gif)
![[분자생물학실험] Western blotting(스트레스로 인한 단백질 발현의 변화관찰)-5](http://images.happyhaksul.com/thumb/498/497116-0005.gif)
분야
hwp목 차
1. 실험 목표 및 배경지식
실험 목표(PURPOSE)
배경지식
-Western Blot의 원리
-Tunica mycin
2. 실험재료 및 실험방법
Materials
Method
3. 결과
4.고찰
5.참고문헌
M9 plate에서 worm을 S-media(1ml)로 모은 다음 2~3회 washing하고 30min동안 ice에서 bacteria가 모두 소화될 수 있도록 한다.(Bacteria 제거)
한번 더 washing해준다.
5000g에서 30s centrifuge한 후, worm만 남기고 S media는 제거해준다.
2X SDS buffer를 50㎕넣어주고 잘 섞일 수 있도록 pipeting한다.
2X SDS buffer가 담겨진 상태로 vortexing하고 ice에서 30min동안 방치한다.
4℃ 10,000g에서 5min동안 centrifuge
상층액을 새로운 tube에 옮겨준다.
Bradford assay(단백질 농도를 확인하는 실험으로 샘플농도를 일정히 맞추어 주기위해!!)
-Blank:2㎕ 1X SDS buffer
-Standards : protein solution(1,2,4,8,16) +2㎕ 1X SDS buffer
-Sample: 2㎕ sample
protein sample 제작 (protein + 1X SDS buffer + 4+dye) (dye는 SDS가 포함된 파란색 염색물질로서 눈으로 얼만큼 전기영동이 잘 일어났는지 볼 수 있도록 한다.)
Sample을 4min동안 끓여주고 spin down.
1)Gel 제작
Separating gel(5ml)
Stacking gel
H2O
1.9ml
H2O
2.1ml
30% acrylamide mix
1.7ml
30% acrylamide mix
0.5ml
1.5M Tris (pH8.8)
1.3ml
1.5M Tris (pH8.8)
0.38ml
10% SDS
0.05ml
10% SDS
0.03ml
10% APS
0.05ml
10% APS
0.03ml
TEMED
0.002ml
TEMED
0.003ml
http://en.wikipedia.org/wiki/Tunicamycin
http://blog.naver.com/killer3br?Redirect=Log&logNo=45814630
