[생명과학] 단백질 분리정제 실습

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레포트 > 공학계열
2011.10.13
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소개글

[생명과학] 단백질 분리정제 실습에 대한 자료입니다.

단백질 정량 & WESTERN BLOTTING
Purpose:
Principle:
- 단백질 정량
- Bradford method
- Protein sample buffer(5X protein sample buffer)
- Electrophoresis
- Immunoblotting (Western blotting)
Material& Reagent :
Procedure:
Discussion:
Discussion:
Reference:

본문내용

2) Protein sample buffer 각각의 조성 물질들의 역할과 boiling 하는 이유
- Protein sample buffer(5X protein sample buffer)
Glycerol : gel에 의해 loading sample이 뜨지 않고 well에 차분히 가라앉게 도와 준다.
Tris-HCl : gel과 주변 buffer의 pH를 맞추기 위해 쓰인다.즉,시료 등의 pH를 일정하게 유지하거나, pH를 측정 때 표준용액으로 주로 사용된다. 세포의 형태를 유지시키는데 중요한 완충작용을 하고 유기용매층과 수용액층 사이에 DNA가 걸려 채취하기 곤란한 경우를 방지해 준다
Bromophenol blue: electrophoresis가 진행되는 동안 sample은 투명하므로 보이지 않기 때문에, gel을 얼마나 running해야 하는지 알 수가 없게 된다. 따라서 Bromophenol blue을 첨가해 주면 전기영동의 진행 상황을 알 수 있다.
2-mercaptoethanol: S-S bond는 끓여도 잘 끊어지지 않기 때문에 sulfide bond를 끊어주기 위한 역할이다.
SDS : 단백질을 denature하여 각각의 polypeptide로 분해하는 역할을 한다.
--Boiling의 이유: 단백질 혼합물이 100℃ 내외에서 SDS와 함께 가열되면 SDS가 polypeptide backbone을 둘러싸게 되어 negative charge를 부여한다. 이를 통해 각각의 polypeptide는 charge가 negative하게 통일되고, 이로 인해 electrophoresis동안 단백질이 charge에 관계없이 크기에 의해 분리될 수 있게 한다.

3) PRO-PREPTM Protein Extraction Solution (lysis buffer)
PRO-PREPTM Protein Extraction Solution 은 각종 세포나 조직으로부터 단백질을 추출할 수 있는 kit로 매우 간편하게 단백질을 추출할 수 있다. 또한 5종류의 protease inhibitor가 함유되어 있어 높은 순도의 단백질을 추출할 수 있습니다. 일반적으로 단백질을 추출할 때 사용되는 detergent는 amphiphilic molecules로 hydrophobic tail 부분과 hydrophilic head 부분으로 구성되어 있다. 두 부분이 서로 결합하여 micelle을 형성하는데, solubilized protein은 lipid-detergent mixed micelle을 형성하고 transmembrane protein은 protein-lipid-detergent complex를 형성한다. 이렇게 micelle을 형성하는 정도를 CMC (critical micelle concentration)라 하는데 이것은 고효율 및 고순도의 단백질 정제에 중요한 역할을 하며 pH, 온도, ionic strength, multivalent ions of organic solvents, 및 detergent 순도등에 의해 좌우된다. 그리고 특성에 따라 detergent는 ionic detergent, non-ionic detergent, 및 zwitterionic detergent로 나눌 수 있다. Ionic detergent는 SDS, LiDS, DOC 등과 같은 cationic 및 anionic detergent로 다시 나뉘며 이들은 highly denaturant로 monomeric protein으로 단백질을 분리시키는 특성이 있어 Western blot analysis 및 분자량 측정 등에 주로 이용한다. 그리고 Triton X-100과 같은 non-ionic detergent는 less protein denaturant이기 때문에 protein-protein interaction등에 주로 이용된다. 또한 CHAPS 등과

참고문헌

Reference:
http://www.vivo.colostate.edu/hbooks/genetics/biotech/gels/principles.html
http://www.cheric.org/ippage/e/ipdata/2008/03/file/e200803-1401.pdf
http://www.nationaldiagnostics.com/article_info.php/articles_id/53
http://www.google.co.kr/url?sa=t&source=web&cd=37&ved=0CEcQFjAGOB4&url=http%3A%2F%2Foldbiosci.snu.ac.kr%2Fincludes%2Fdownload.php%3Ffile%3D%25B4%25DC%25B9%25E9%25C1%25FA%25C0%25C7_%25C0%25FC%25B1%25E2%25BF%25B5%25B5%25BF.hwp%26path%3DYm9hcmQ%3D&rct=j&q=%EB%8B%A8%EB%B0%B1%EC%A7%88%20%EC%A0%84%EA%B8%B0%EC%98%81%EB%8F%99%EC%9D%98%20%EC%9B%90%EB%A6%AC&ei=oY_pTcLsHYmYvAO55MjEDw&usg=AFQjCNEce0z5AAKfEWdsHEyP93sUCI4UuQ&cad=rjt
http://bric.postech.ac.kr/myboard/read.php?id=22&Page=39&Board=new_protech&PARA1=24
현창기 교수님 실습 강의 자료
http://ws.ajou.ac.kr/~biotech/study/western/western%20blot.htm
http://xm182611.reportworld.co.kr/
효소 단백질 정제법. 안용근. 양서각. 1994. 63~70쪽
실험생화학. 한국생화학회. 탐구당. 1986. 230~231쪽, 255~257쪽
Chemistry Principles & Reaction. Masterton& Hurley.Saunders College Pub. 333~337쪽
http://blog.naver.com/PostView.nhn?blogId=nango0o&logNo=140072058692
http://blog.naver.com/pretty7721?Redirect=Log&logNo=50017772809
www.google.co.kr
www.naver.com

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