분야
doc2. Subject
3. Principle
4. Reagents
5. Apparatus
6. Procedure
7. Observations & Results
8. Discussion
Experiment #2,
HPLC의 기계는 다음과 같이 구성되어 있으며 이러한 과정을 따라서 혼합 성분을 각각의 단일 성분으로 분리할 수 있게 된다.
6) Eluent Reservoir: solvent를 담고 있는 bottle 로서 가장 먼저 이곳에서 용매를 준비하고 앞으로 혼합 성분을 분리할 때 이동상의 역할을 하게 된다.
7) Degasser: solvent에 녹아있는 gas(용존산소, 질소, 기포)를 제거하는 장치로서 따라서 mobile phase에 대한 noise 현상을 줄어주는 역할을 한다.
8) Pump: HPLC 시스템에서 사용하는 가장 중요한 과정이라고 할 수 있으며 이동상으로 사용되는 solvent를 reservoir에서 따서 injector를 거쳐 column으로 연속적으로 이동하고 그 결과 최종적으로 detector을 통과한 후에 mobile phase인 solvent와 injector을 통해 주입된 sample이 밖으로 나올 수 있도록 압력을 가해주는 장치이다. 이처럼 강한 압력이 주어지기 때문에 물질이 분리되는 시간을 획기적으로 단축할 수 있게 되었고 이것이 HPLC의 가장 주된 특징이 된다. 이 때 pump는 일정한 압력과 속도를 유지해야 하기 때문에 이러한 조건을 충족시켜야 하며, 하나의 solvent 이외에도 다양한 solvent를 사용할 수 있다는 점에서 다른 chromatography 방법에 비해 더욱 향상된 분리 능력을 획득할 수 있게 되는 과정이다.
9) Injector: 분석하고자 하는 시료를 주입하는 장치로서, 혼합 성분이 들어있는 sample을 미리 넣어진 solvent의 흐름에 실어 줌으로서 앞으로의 분리 과정을 준비하는 단계이다.
10) Column: column은 가장 기본적인 chromatography 원리를 그대로 이용한 것으로 혼합상태의 sample를 화학적/물리적 특성에 따른 retention 정도 차이에 의해서 단일 성분으로 분리할 수 있는 장치를 의미한다. 따라서 sample에 따라서 column의 크기 및 충진제 종류도 알맞게 선택해야 한다. Column의 종류에는 순상, 역상 등이 있으며 다음과 같다.
A. 순상: polarity에 의해 분리가 일어나고 이 때 mobile phase인 solvent을 non-polar한 것을 사용하기 때문에 극성이 큰 물질이 나중에 분리되어 나온다는 특징을 가진다
B. 역상: 이 방법도 마찬가지로 polarity에 의해서 분리과정이 일어난다. 하지만 역상에서는 polar solvent를 사용하기 때문에 비극성인 물질이 나중에 분리되어 나온다는 차이점을 가진다. (참고로 이 때의 상대적 극성의 정도를 판단할 때, HPLC 이동상 > silica gel > TLC 이동상 이라고 판단할 수 있다).
