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Bacillus licheniformis GA9가 생산하는 키틴 분해효소의 정제 및 특성
분야 자연과학 > 생물
저자 황동호 ( Dong Ho Hwang ) , 홍성욱 ( Sung Wook Hong ) , 황형서 ( Hyung Seo Hwang ) , 정건섭 ( Kun Sub Chung )
발행기관 한국미생물생명공학회(구 한국산업미생물학회)
간행물정보 한국미생물·생명공학회지 2016년, 제44권 제4호, 470~478쪽(총9쪽)
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국문초록
지렁이의 장내로부터 분리한 미생물 중에서 키틴 가수분해 활성이 우수한 미생물을 선발하였으며, 이를 동정하여 Bacillus licheniformis GA9으로 명명하였다. B. licheniformis GA9이 생산하는 키틴 분해효소의 정제는 배양상등액 40-60% 황산암모늄 침전, 음이온교환 크로마토그래피, 겔 크로 마토그래피를 사용하여 정제하였다. 최종적으로 정제한 키틴 분해효소는 45.2배로 정제되었고 효소단백질 회수율은 20.0%를 나타내었다. 정제한 키틴 분해효소의 분자량은 약 52.1 kDa으로 나타났으며, N-terminal amino acid sequencing 분석결과, 아미노산 서열은 D-S-G-K-N-G-K-I-I-R-Y-Y-P-IR로확인되었다. 키틴 분해효소의 최적반응 pH와 pH 안정성을 측정한 결과, pH 5.0에서 최대 활성을 나타내었으며 pH 5.0-6.0에서 안정성을 나타내었다. 키틴 분해효소의 최적반응 온도와 온도안정성의 경우, 40℃에서 최대 활성을 나타내었으며, 60℃까지 60%의 잔존 활성을 나타내었다. 정제한 키틴 분해효소는 10 mM Co2+ 금속이온에 의해 효소활성이 증가하였으며, Fe2+과 Cu2+ 금속이온에 의해 효소활성이 감소하였으나, EDTA 첨가시 감소한 효소활성이 일부 회복되었다. 정제한 효소의 Km 및 Vmax는 각각 4.02 mg/ml와 0.52 mg/min이었다. 또한 키틴 분해효소는 생명공학, 생물의약, 농업, 식품영양 등 다양한 산업분야에서 응용이 가능하다.
 
 
영문초록
A bacterium producing a large amount of chitinolytic enzyme was isolated from the intestinal tract of earthworm. The isolate was identified as Bacillus licheniformis by 16S ribosomal RNA analysis and designated as B. licheniformis GA9. The enzyme was purified by 40-60% ammonium sulfate precipitation, diethyl-aminoethyl groups exchange chromatography, and gel filtration chromatography. The molecular weight was estimated to be 52.1 kDa and the N-terminal amino acid sequence was D-S-G-K-N-G-K-I-I-R-Y-YP- I-R. The optimum activity of the purified chitinolytic enzyme was shown at pH 5.0 and 40℃, and the enzyme was stable in the ranges of 20-50℃ and pH 5.0-6.0. Enzyme activity was increased by Co2+, while it was inhibited by Cu2+ and Fe2+. But it was recovered by chelating metals with ethylenediaminetetraacetic acid. The Km and Vmax values of the purified enzyme were 4.02 mg/ml and 0.52 mg/min, respectively. The chitinolytic enzyme characterized in this study has potential applications in areas such as biotechnology, biomedicine, agriculture, and nutrition.
 
 
Purification, chitinolytic enzyme, Bacillus licheniformis, GA9
 
 
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