치아 우식원성 세균 배양
분야
hwp1. Introduction
2. Method
3. Result
4. Discussion
치아 우식원성 세균 염색
1. Introduction
2. Method
3. Result
4. Discussion
5. Reference
1. Introduction
구강 내에서 치아우식을 발생시키는 원인은 여러 가지가 있지만, 그 중 가장 강력한 증거를 가진 것은 구강내 미생물에 의한 것이다. 구강 내 세균 외에 치아우식에 영향을 끼치는 인자로는 당분, 치아 표면면적, 치아의 발육상태, 타액 분비 량(flow rate)등이 있다. 본 실험에서는 구강 내에 존재하는 우식원성 세균(cariogenic bacteria)의 존재를 확인할 수 있다. 아울러 이러한 우식원성 세균의 수를 정량적으로 측정하여, 구강내 얼마나 많은 수의 세균이 존재하는지 추정할 수 있다.
2. Method
① 피실험자는 실험 당일 식사 후 이를 닦지 않는다.
② 피실험자의 치면에서 plaque를 채취한다.
③ 치태의 무게를 측정한다.
④ 치태가 담긴 튜브에 1ml의 생리식염수와 glass bead를 넣고 충분히 voltex한다.
⑤ 이후 10배/ 100배 희석 시키면서 glass bead를 이용하여 충분히 voltex한다.
⑥ 각 plaque를 MS(Mitis salivarius) agar, MSB(Mitis salivarius Bacitracin) agar 두 종류의 agar plate에 도말한다. (Autoplate 이용)
⑦ 배양기에 넣고 3일후에 colony의 형성여부를 관찰하고 수를 계산한다.
3. Result
치태의 무게 : 1.151mg
MS agar
MSB agar
Sample No.
원액
*10
*100
원액
*10
*100
집락수
412
536
117
92
11
21
127
108
14
8
0
0
1mg내의 세균수
258573
570060
872819
64098
60006
0
0
* 치태 1mg내의 세균수 (집락의 평균수로 이용)
집락수 × (1000㎕/segment의 volume) × 희석배율 / 치태의 무게(mg)
4. Discussion
Selective Agar
(Bacitracin)
MS agar는 potassium tellurite가 없는 경우 대부분의 Streptococci가 자랄 수 있다. 여기에 Bacitracin이라는 항생제와 potassium tellurite가 존재하면 몇몇 미생물만 자라라 수 있는데, 주로 Streptococcus Mutans가 자란다. 이번실험에서는 우식원성 세균이 선택적으로 자라날 것으로 기대되었다. 왜냐하면 MSB(mitis salivarius bacitracin) agar에 bacitracin이라는 항생제가 선택적으로 세균을 제거하고 배지양분의 특성상 생존할 수 있는 세균의 종류가 한정되기 때문이다. Bacitricin은 C66H103N17O16S 의 화학식을 갖는 물질로 다음과 같은 구조를 가지고 있다. Bacillus subtilis var. Tracy에서 생성되는 cyclic polypeptide로서 bacterial cell wall의 peptidoglycan의 형성을 억제한다. 주로 gram 양성균에 작용하여 효과를 나타내며 드물게 그람 음성균에도 작용할 수 있다. Streptococcous Mutans의 경우 이에 대한 내성을 가지고 있기 때문에 MSB배지에서도 잘 자랄수 있다.
실험 결과 분석
구강미생물학, J. Bagg외, 최봉규 외 역, 군자출판사, 2001
