분야
hwp2. 세포배양에 필요한 기구
3. 배양용 배지 및 시약
4. 세포의 동결보존법
5. 세포의 해동법
6. 세포의 계대법
생물체의 조직으로부터 분리된 세포를 배양하는 것으로 식물에서는 캘러스(유합조직) 일부를 액체배양하거나 동식물의 종양 세포를 배양하는 일이 흔하다. 세포배양으로 얻은 세포군이 경우에 따라서는 1개의 개체로 생장하기도 하고, 단순한 세포 덩어리로만 남아 있기도 하는데, 이는 형태형성상의 문제점이며 앞으로의 검토가 필요한 부분이다.
2. 세포배양에 필요한 기구
⑴ 무균실
1) Air Conditioner(에어컨)
무균실의 온도 및 습도 조절함으로써 잡균의 공기오염 및 증식을 막는다.
2) 도립현미경
광원이 위에 있고, 대물렌즈가 아래에 있다. 세포의 모양을 관찰하고 자기가 실험에 이용하는 세포의 모습을 파악하는데 이용된다.
3) CO2 Incubator
배지 중에 함유하고 있는 중탄산나트륨과 이산화탄소 가스와의 평형에 의해 배지의 pH의 조절이 된다. 내부의 가스조성은 5% 이산화탄소, 95% 공기로 유지하고 있다. 배양기 안에 있는 배지의 증발을 막기 위해 내부는 포화수증기로 차 있어 습도는 거의 100%이다. 배양기 내에 잡균이 오염되지 않도록 내부청소를 한다.
4) 탁상형 원심기
세포의 획수, 세포와 배양액의 분리를 할 때 사용하는 기구로 소형의 원심기로서
조작성이 좋은 auto balance type을 선택한다.
5) Cell Counter
조작의 신속성, 대량 샘플을 처리할 수 있는 셀카운터(Cell Counter)가 필요하다.
6) Clean Bench
무균필터 및 송품기를 사용하여 무균공기를 항상 내부로 보낸다. 크기는 100cm x 70cm x 100cm 정도면 충분하다. 사용하지 않을 때는 자외선등을 언제나 켜놓도록 한다. 사용 후 paper towel에 70% 에탄올을 적셔 깨끗하게 닦아 낸다.
(2) 세포배양
1) Autocalve
고온에 견디지 못하는 플라스틱제품의 멸균과 무기염류의 수용액 등 가열에 견디는 용액의 멸균에 사용된다. 멸균조건은 121℃, 20분이 표준적이다.
2) 건열멸균기기
피펫이나 각종 유리제품 등 열에 강한 기구의 멸균에 사용한다. 표준적인 멸균조건은
180℃에서 1hr이다.
3) Deep Freezer
세포의 동결보존(약 1년 이내) 및 시료의 초저온 보존에 이용한다. 돌발적 정전 등의 사태에 대비하여 액화탄산가스를 이용한 보조냉각장치를 연결해야 한다.
4) 액체질소 보존통
세포의 장기보존에 이용된다. 액체질소 보존법에는 체액질소용액내보존(-196℃)과
액체질소증기내보존(-120℃)이 있다.
5) 증류수, 초순수 제조장치
무혈청배양에 사용하는 물의 순도와 배지의 조제에 사용하는 물의 순도가 매우 중요하기 때문에 증류수, 초순수 제조장치가 필요하다.
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