[실험] 아밀라아제_활성_측정
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![[실험] 아밀라아제_활성_측정-3](http://images.happyhaksul.com/thumb/371/370246-0003.gif)
![[실험] 아밀라아제_활성_측정-4](http://images.happyhaksul.com/thumb/371/370246-0004.gif)
분야
hwp-아밀라아제 활성 측정
-카테콜산화 효소 활성
1. 이론
2. 실험목적
3. 실험도구
4. 실험방법
5. 실험결과
6. 고찰
7. 참고문헌
-아밀라아제 활성 측정
침 속의 알파 아밀라아제는 녹말, 글리코겐의 알파 아밀라아제의 결합만을 선택적으로 가수분해하고 아밀로펙틴과 글리코겐의 알파 1.6결합, 셀룰로오스의 베타 1,4결합에는 작용하지 않는다. 알파아밀라아제에 의한 녹말의 가수분해에 의해 덱스트린과 분자량이 비교적 큰 각종 올리고당이 생기고, 시간이 경과함에 따라 환원성 이당류가 생긴다. 녹말과 분자량이 큰 덱스트린은 요오드와 반응하여 푸른색을 나타내나, 이보다 분자량이 다소 작은 덱스트린은 적갈색, 훨씬 작은 덱스트린은 요오드에 의해 착색되지 않는다. 따라서 요오드 시약으로 녹말의 가수분해 정도를 확인할 수 있다. 30개 이상의 포도당 잔기를 갖는 전분을 침과 반응시키면, 파장 700nm에서 흡광도를 측정함으로서 알파아밀레이즈에 의한 전분 가수분해 정도를 측정할 수 있다.
=Dextrinizing power의 계산
(전분과 요오드복합체의 푸른색을 10% 감소시키는 활성을 가진 효소의 양)
D.P = (DO-D)/DO *10
D : 효소 반응 용액의 흡광도
D0 : 대조용액의 흡광도
-카테콜 산화효소라는 효소는 식물조직에서 발견된다. 카테콜산화효소는 식물세포가 손상을 받을 때 방출되는데 카테콜과 반응하여 벤조퀴논을 형성한다. 벤조퀴논은 박테리아를 제거하는 독소로서 손상된 식물조직이 부패하지 않게 도와주는 역할을 하며 특별한 갈색을 나타낸다.
2.
실험목적
* 아밀라아제의 온도에 따른 활성도를 측정해보자.
* 카테콜 옥시데이즈에 의한 벤조키논 생성에 미치는 온도의 영향을 알아 본다.
3.
실험도구
* 침, 워터배스, 인큐베이션, 시험관, 시험관집개, 인산염완충용액, 전분용 액, HCl용액, 요오드 용액, 흡광도기.
* 감자, 워터배스, 인큐베이션, 시험관, 시험관집개, 피펫, 카테콜용액
4.
실험방법
*아밀라아제 활성 측정
1. 침액을 모아 증류수로 희석한 후 절반씩 나눈다.
그중 하나는 37도의 물중탕 속에 두고 (효소액) 다른 하나는 대조군으 로 끓는 물에서 2분정도 가열한 후, 37도의 물중탕 속에 넣어둔다.
2. 1ml 효소액 + 1ml 0.05M 인산염완충용액 pH7 +1ml 1% 전분용액
1ml control ->37도에서 10분간 incubatation
3. 1ml 0.1N HCL 용액 + 0.5ml 요오드 용액 (0.05% iodine/0.5% KI)
4. 반응을 종결시키고 남은 전분이 요오드와 복합체를 형성함
5. 700nm에서 흡광도를 측정하도록 한다.
*카테콜 산화효소 활성 측정
5개의 테스트 튜브를 아래와 같이 만든다
시험관1
시험관2
시험관3
시험관4
시험관5
물
10
10
10
10
10
감자
-
O
O
O
O
카테콜
5
5
5
5
5
온도
실온
100
실온
0
40
->20분 후에 관찰한다.
