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[분자생물학실험] DNA sub-cloning, PCR(Polymerase Chain Reaction)

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레포트 > 공학계열
2010.07.13
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소개글

[분자생물학실험] DNA sub-cloning, PCR(Polymerase Chain Reaction)에 대한 자료입니다.

Experiment 1

Purpose

Principle

Method

Result

Discussion

Experiment 2

Purpose

Principle

Method

Result

Discussion

본문내용

Experiment 1:
DNA sub-cloning

Purpose

Day 1:
DNA sub-cloning의 1단계: 원하는 유전자를 분리한다.

유전자를 복제하기 위해서는 우선 bacterial cell로부터 DNA를 분리해내고, 그로부터 원하는 유전자를 잘라내야 한다. 이와 같이 이 실험에서는 DNA sub-cloning의 첫 단계로서 원하는 유전자를 분리해내는 단계를 수행한다.

1. Digestion of DNA with Restriction Enzyme
- Plasmid로부터 FabG DNA를 절단한다.
2. Agarose Gel Electrophoresis
- Electrophoresis를 통해 절단된 FabG DNA와 plasmid를 분리한다.
3. Gel Purification
- FabG DNA의 정제

Day 2:
DNA sub-cloning의 2단계: 얻은 유전자를 cloning vector에 삽입한다.

1단계 실험에서 분리한 유전자를 cloning vector에 넣는다. 이 실험에서 사용하는 cloning vector는 pET-14b로 BamHⅠ와 NdeⅠ의 restriction enzymes으로 유전자가 삽입될 부분을 자르고, FabG를 삽입하고 붙인다.

DNA sub-cloning의 3단계: 유전자가 삽입된 DNA를 세포 내로 주입한다.

1. 우리가 원하는 DNA를 insert 하기 위해서 bacteria cell을 competent cell로 만든다.
2. Heat shock transformation을 통해 DNA를 competent cell에 투입한다.

#DNA #subcloning #PCRPolymerase #분자생물학실험 #PCR

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