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분야
hwp1.1. 기존단백질 생산의 단점
1.2. 불멸화 세포주의 필요성
2. 불멸화 세포주의 개념
2.1. 불멸화 세포주란?
2.2. Cell cycle
2.3. Celluar senescence
2.4. Apoptosis
3. 불멸화 세포주의 확립
3.1. SV40LT를 이용한 불멸화 세포주의 확립
3.1.1. SV40이란?
3.1.2. SV40의 작용기작
3.1.3. case study
3.2. EBV를 이용한 불멸화 세포주의 확립
3.2.1. EBV란?
3.2.2. EBV의 작용기작
3.3. Bcl-2 Family를 이용한 불멸화 세포주의 확립
3.3.1. Bcl-2 Family란?
3.3.2. Bcl-2 Family의 작용기작
3.3.3. case study
3.4. hTERT를 이용한 불멸화 세포주의 확립
3.4.1. hTERT의 작용기작
3.4.2. case study
3.5. CpG island methylation을 이용한 불멸화 세포주의 확립
3.5.1. CpG island methylation의 작용기작
3.5.2. case study
4. 정상성검증
4.1. Oncogenic H-ras gene의 과발현을 통한 불멸화 세포주의 정상성 검증
4.2. DNA damage 유도 시 세포생존률 측정을 통한 불멸화 세포주의 정상성 검증
4.3. Soft agar assay
5. 이용사례
5.1. Virus 백신의 숙주세포
5.2. 유용생리단백질의 생산
5.3. 암세포 연구
5.4. 세포치료제
6. 결론
7. Reference
1.1. 기존 단백질 생산의 단점
어떤 상품이 업그레이드가 되었다면 그 전의 것에 단점이 있었기 때문일 것이다. 불멸화 세포주도 그러한 것의 일종이다. 업그레이드라는 말이 언어적으로 딱 들어맞는 말인지는 모른다. 하지만 정상적인 세포가 불멸화 세포주가 됨으로서 얻을 수 있는 이점이 많다는 것은 분명하다. 그렇다면 기존의 단백질 생산의 단점은 무엇이 있는지 보자. 유전자 재조합을 통한 단백질을 생산하기 위해 대표적으로 쓰이는 Prokaryotes를 보자. 이들은 Eukaryote들과는 다르게 Gene을 발현하는 중 ER과 GA에서 생산된 단백질에 당이나 지질을 붙이는 Post Translational Modification과정을 거치지 않는다. 따라서 동물 세포에서 생산되는 단백질과 같이 당단백질이나 당지질 등이 필요하게 되면 생산을 할 수 없다. 따라서 이런 식의 단백질은 많은 한계가 있다. 또한 Yeast는 정도가 크지는 않지만 동물세포의 Gene과 Triplet Codon의 차이를 보인다. 이러한 이유로 Yeast를 통해 단백질을 생산하는 데에 문제가 발생할 수 있다. 하지만 이러한 것들 보다 중요한 점은 정상적인 Animal Cell Line은 수명의 한계를 크게 가지고 그에 따라 생산량이 적을 수밖에 없다는 점이다. 바로 이러한 점을 해결하기 위한 노력이 불멸화 세포주를 만들게 된 가장 큰 이유일 것이다.
1.2. 불멸화 세포주의 필요성
거두절미하고 결론부터 말하자면 불멸화 세포주가 필요한 이유는 유용한 생리활성단백질의 생산을 쉽고 빠르게 할 수 있다는 것이다. 아무리 유용한 생리활성단백질이라도 양이 굉장히 적어서 쉽게 사용을 하지 못하는 경우가 많다. 이 때문에 최근 생리활성단백질이나 항체등을 대량으로 얻기 위해서 동물세포를 이용하여 이들을 생산하는 기술이 핫이슈가 되고 있다. 하지만 위에서 말했든 기존의 단백질 생산 방법에는 여러 단점이 있다. 특히 정상적인 세포주는 세포노화라는 수명의 한계를 가지고 있다. 따라서 불멸화 세포주를 만들게 된 것이다. 기본적으로 불멸화 세포주는 정상적인 Animal Cell Line과 달리 수명이 훨씬 길기 때문에 유용한 단백질을 많이 생산할 수 있다. 따라서 유용생리활성단백질을 생산하는 비용을 절감할 수 있을 것이다.
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15) W. S. Klug et al., , 9th edition, 2008.
16) 서울 의과학연구소, EBV Immortalization formation
17) 김용성, «유전자 조절 비밀 간직한 메틸레이션》, http://blog.naver.com/PostView.nhn?blogId=dorosy80&logNo=30039827781&widgetTypeCall=true), 2002.
18) 최윤재, , 2006.
