![[생화학] Polymerase Chain Reaction(PCR)-1](http://images.happyhaksul.com/thumb/485/484889-0001.gif)
![[생화학] Polymerase Chain Reaction(PCR)-2](http://images.happyhaksul.com/thumb/485/484889-0002.gif)
![[생화학] Polymerase Chain Reaction(PCR)-3](http://images.happyhaksul.com/thumb/485/484889-0003.gif)
![[생화학] Polymerase Chain Reaction(PCR)-4](http://images.happyhaksul.com/thumb/485/484889-0004.gif)
![[생화학] Polymerase Chain Reaction(PCR)-5](http://images.happyhaksul.com/thumb/485/484889-0005.gif)
![[생화학] Polymerase Chain Reaction(PCR)-6](http://images.happyhaksul.com/thumb/485/484889-0006.gif)
![[생화학] Polymerase Chain Reaction(PCR)-7](http://images.happyhaksul.com/thumb/485/484889-0007.gif)
![[생화학] Polymerase Chain Reaction(PCR)-8](http://images.happyhaksul.com/thumb/485/484889-0008.gif)
![[생화학] Polymerase Chain Reaction(PCR)-9](http://images.happyhaksul.com/thumb/485/484889-0009.gif)
![[생화학] Polymerase Chain Reaction(PCR)-10](http://images.happyhaksul.com/thumb/485/484889-0010.gif)
![[생화학] Polymerase Chain Reaction(PCR)-11](http://images.happyhaksul.com/thumb/485/484889-0011.gif)
![[생화학] Polymerase Chain Reaction(PCR)-12](http://images.happyhaksul.com/thumb/485/484889-0012.gif)
분야
doc1. Introduction
1. DNA 의 변성(denaturation)
2. Primer 의 결합(annealing)
3. DNA의 합성(polymerization)
2. Method
3. Result & Discussion
PCR 산물의 전기영동은 agarose gel에서 시행합니다. 물론 때에 따라서 polyacrylamide gel을 쓸 수도 있지만 여기서 다룰 내용은 아닌 것 같습니다.
전기영동(electrophoresis)의 원리는 다 아시는 바와 같이 시료를 gel에 심은 후 전기를 걸어서 시료의 각 성분이 크기에 따라 다르게 움직이는 성질의 차이로 분리하는 것입니다.
Electrophoresis buffer solution
Electrophoresis를 할 때 gel이 잠기는 buffer solution에는 여러가지가 있으나 주로 TAE와 TBE가 많이 쓰입니다. TAE는 주로 agarose electrophorsis에, TBE 는 DNA sequencing에 쓰입니다. 조성은 다음과 같으며 대량을 쓰므로 미리 많이 만들어놓고 필요할 때마다 희석해서 부어서 씁니다.
Commonly used electrophoresis buffers
Buffer Concentrated stock solution (per liter)
________________________________________
Tris-acetate (TAE) 50x
242 g Tris base
57.1 ml glacial acetic acid
100 ml 0.5 M EDTA (pH 8.0)
Generally used for agarose EP
Tris-borate (TBE) 20x
121.1 g Tris base
61.7 g boric acid
7.44 g Na2EDTA-2H2O
Generally used for DNA sequencing
________________________________________
Gel loading buffer
그리고 DNA 시료를 담는 loading buffer가 필요합니다. 이 buffer는 분자량이 큰 glycerol 등 무거운 물질이 함유되어 있어서 DNA가 든 시료를 gel 속에 잘 가라앉히고, 파란색을 내는 bromophenol blue가 들어 있어서 electrophoresis하는 동안에 현재 어느 정도 진행되어 있나 눈으로 보아 알 수 있게 해 줍니다. 다음과 같은 몇몇 종류가 쓰입니다.
Gel loading buffers (6x)
________________________________________
I
0.25% bromophenol blue
0.25% xylene cyanol FF
40%(w/v) sucrose in water
II
0.25% bromophenol blue
0.25% xylene cyanol FF
15% Ficoll(Type 400) in water
III
0.25% bromophenol blue
