[생화학 실험] TLC를 이용한 아미노산의 적정실험
![[생화학 실험] TLC를 이용한 아미노산의 적정실험-1](http://images.happyhaksul.com/thumb/493/492713-0001.gif)
![[생화학 실험] TLC를 이용한 아미노산의 적정실험-2](http://images.happyhaksul.com/thumb/493/492713-0002.gif)
![[생화학 실험] TLC를 이용한 아미노산의 적정실험-3](http://images.happyhaksul.com/thumb/493/492713-0003.gif)
![[생화학 실험] TLC를 이용한 아미노산의 적정실험-4](http://images.happyhaksul.com/thumb/493/492713-0004.gif)
분야
docx1. 실험일시
2. 실험목적
3. 실험재료
4. 실험방법
5. 실험원리
[TLC chromatography]
[Amino acid 분리 방법: ninhydrin reation ]
얇은 막 크로마토그래피(thin layer chromatography: TLC)에서는 거름종이 대신에 유리판에 실리카겔, 셀룰로오스 분말 또는 산화 알루미늄 등과 같은 지지체의 얇은 막을 입힌 것을 사용한다.
따라서, TLC 법은 원리상으로는 종이 크로마토그래피와 크게 다를 것이 없다. TLC 법은 종이 크로마토그래피에 비해 시간이 훨씬 절약될 뿐 아니라(전개 시간은 대개 20분∼1시간 정도), 전개가 효과적으로 이루어지며, 그 반점에는 물질이 농축되어 있어서 상당히 작은 농도의 화합물까지도 검출할 수가 있다. TLC의 지지체는 거름종이와는 달리 열이나 진한 무기산에 잘 견딜 만큼 매우 안정하다. TLC 법을 실시할 때 지지체에 미리 형광 색소 같은 것을 섞어 두면 반점을 확인하는데 큰 도움이 된다. 또, 시료에 따라 적당한 지지체를 골라 쓸 수가 있고, 경우에 따라서는 이온 교환성을 지닌 물질을 지지체로 사용할 수 도 있다.
즉, 이러한 원리를 이용하여, 아미노산이 고유의 side chain의 성질에 따라 분리 됨을 알 수 있다. TLC에서 이동한 아미노산은 ninhydrin으로 검출될 수 있다.
[Amino acid 분리 방법: ninhydrin reation ]
Alpha-amino acid는 pH4~8, 100’C 근처에서 ninhydrin과 반응하여 자주색 또는 북은 자주색의 착색물질을 만든다. 착색물질의 색깔은 아미노산에 따라 다르며, 아미노산인 prolin과 hydroxyl-prolin의 경우는 황색이다. 1차 아민과 NH3도 양성반응을 나타내지만 이 때는 Co2가 유리되지 않는다. ninhydrin실험은 매우 sensitive하여 아미노산 및 단백질의 확인 뿐 아니라 정량에도 사용된다
