DNA extraction 시 사용되는 phenol의 pH : 7.9(RNA 시는 4.5)
Chloroform
Phenol이 작용시 적은 양이나마 수용액에 녹는다. 이렇게 녹은 phenol을 수용액에서 제거 및 Interphase가 잘 형성되게 해준다
Isoamyl alcohol
실험 시 거품이 생기는 거 방지 및 Interphase 형성 도움
Phenol : Chloroform : Isoamyl alcohol = 25 : 24 : 1 또는
Pheno
DNA의 구조에 차이로부터 분리하는 방법이 있다. 플라스미드와 염색체는 구형인데 염색체는 extract 시 구형에서 선형조각으로 깨어지며 플라스미드에는 구형으로써 변화가 없다. 이 구조적인 차이점을 이용하여 정제된 플라스미드를 얻을 수 있다.
- plasmidDNA 정제방법
1) 대규모 정제(large scale preparatio
DNA와 같이 전기영동 될 때, DNA가 움직인 정도를 알 수 있게 하는 역할을 한다.
③ 전기영동 buffer
TAE (Tris-acetate EDTA):DNA분자량이 큰 경우, agarose electrophorsis 에서 쓴다.
TBE (Tris-borate EDTA):DNA분자량이 작은 경우, DNA sequencing에 쓰인다.
4. Materials & Equipments
Restriction enzymes(BamHⅠ, NdeⅠ), pET-14b plasmid, FabG gene
Alkaline lysis method
- 세포의 cell wall과 cell membrane을 부수고 DNA만을 분리하는 방법
- Chromosomal DNA 와 plasmid의 고유한 형태 구조 차이를 이용 !
; Chromosomal DNA - 상대적으로 size가 크고, double heilx
Plasmid - size가 작고, supercoiled 형태 -> pH에 변화에 의한 변성↓
Alkaline Lysis Method
DNA gel electrophoresis(전기영동)
- DN
실험1 [Digestion of DNA with Restriction Enzyme]
실험준비물 :
Materials-restriction enzymes (ndeⅠ,BamhⅠ), restriction enzyme reaction buffer, DDW
Equipments-water bath, brief centrifuge
Procedure :
① e-tube를 두 개 준비하여, 각각 plasmid only와 inserted plasmid를 5μl 넣고, DDW 2μl,10x reaction buffer, 제한효소를 각각 1μl 넣는다. 제한효소를 가