유전자가 삽입된 vector(recombinant DNA)를 bacteria 세포 내로 주입한다.
4) Bacteria 중에서 올바르게 만들어진 clone을 확인하고 선택한다.
2. 재조합DNA
․ 재조합DNA 기술 정의
기본적으로 재조합DNA는 두 과정으로 이루어진다.
첫째는 DNA 단편을 플라스미드나 박테리오파지처럼 독자적 복제능력이
DNA 분자를 recombinant DNA(재조합DNA)라고 한다.
4. 재조합DNA를 시험관으로 이동: DNA복제를 위한 효소 장치를 제공하는 숙주세포로 이동시킨다.
5. 재조합DNA가 들어 있는 숙주세포를 선택 또는 확인: 항생제 내성을 이용해서 원하는 유전자를 선별한다.
Ι. DNA sub-cloning 의 1단계 : 원하는 유전자를 분리한
재조합유전자를 숙주세포에서 형질을 발현시키는 데 최초로 성공한 것은 1973년 F.J.코벤 등이다. 재조합DNA 기술은 1953년 유전자가 DNA라는 사실과 DNA의 구조가 밝혀지면서 예견될 수가 있었다. 이 재조합DNA 기술은 박테리오파지와 플라스미드에 관한 연구와 DNA에 작용하는 효소들, 특히 제한효소와 DNA
제한효소가 인식하는 부위는
5'--CCCGGG--3' 5'--CCC GGG--3'
3'--GGGCCC--5' 를 인식해서 3'--GGG CCC--5' 와 같이 수직으로 자르며 이를 blunt end 형태라고 부른다
3. 전기영동(agarose gel electrophoresis)에 의한 유전자의 분리
a. Agarose gel 전기영동 시 DNA의 이동에 영향을 주는 요인들로는 DNA의 분자
플라스미드에서 세균DNA를 완전히 분리해야 한다.
a. 세균DNA를 분리하는 방법들
-크기에 따라 분리해 낼 수 있다.
-구조적인 차이에 의해 분리해 낼 수 있다.
(2) PCR
1)중합 효소 연쇄 반응이다.
2)특정 DNA로부터 DNA polymerase에 의해 필요한 유전자를 대량 복제할 수 있는 기술이다.
A.과정
a.tagging단계
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