Low-melting temperature (LMT) – 저온에서 녹는 특별한 agarose사용
Electroelution – 전류를 통해 DNA를 분리하는 방법
1) Dialysis tubing : dialysis tubing 통해 DNA분리 방법
2) NA-45(nitrocellulose)membrane – Gel 조각에 NA-45membrane붙이고 전기장 주어 분리하는 방법
High-salt extraction – 고농도 Na+에 의해 agarose g
2. 제한효소(restriction enzyme)에 의한 유전자의 분리
유전자 클로닝은 DNA분자를 아주 정확하고 반복적으로 절단할 것을 요구한다. 각 Vector 분자의 circle을 열어서 새로운 DNA가 삽입될 수 있도록 각 분자마다 하나의 같은 위치가 절단되어야 한다. DNA를 자른다는 것은 nucleotides를 연결하고 있는 phosphodiester b
DNA는 Protein등와 함께 침전되고 Plasmid는 상층액에 속함
Phenol : 수용액에 녹아 있는 단백질을 제거(endonuclease)
Phenol 안에는 8-hydroxyquinoline이란 물질이 들어 있고, 산화 시 붉은 색을 띄게 됨
DNAextraction 시 사용되는 phenol의 pH : 7.9(RNA 시는 4.5)
Chloroform
Phenol이 작용시 적은 양이나마 수용액에 녹는다.
- 정제과정
플라스미드의 정제는 total cell DNA의 일반적인 분리방법과 같다. 플라스미드를 지니는 세포를 액체배지에서 배양하여 수확하고 cell extract를 하면된다. extract는 단백질을 제거하고 에탄올침전으로 DNA를 응축시킬 수 있다. 그러나 totall cell DNA 분리와 plasmid 정제와는 중요한 차이점이 있다. 플라