Alkaline lysis method
- 세포의 cell wall과 cell membrane을 부수고 DNA만을 분리하는 방법
- Chromosomal DNA 와 plasmid의 고유한 형태 구조 차이를 이용 !
; Chromosomal DNA - 상대적으로 size가 크고, double heilx
Plasmid - size가 작고, supercoiled 형태 -> pH에 변화에 의한 변성↓
Alkaline Lysis Method
DNA gel electrophoresis(전기영동)
- DN
2. Method
[실험재료]
premix, template & primer, D.W, mineral oil, thermocycler(PCR기계), Seakem LE agarose, gel caster, 1×TAE, EtBr, 마이크로피펫, 1.5㎖ tube
[실험방법]
① premix가 들어있는 20㎕ tube에 template DNA 1㎕, primer 2㎕를 D.W 17㎕를 넣고 잘 섞기 위해 vortexing 해준다.
② 적당하게 centrifuge 해준다.
- vortexing 시에 위로
DNA 절단 및 분석, Ligation
3.1.1. Digestion of DNA with Restriction Enzyme
I. Apparatus
- Water bath, brief centrifuge
II. Reagents
- Plasmid, DDW, restriction enzymes [NdeI, BamHI], restriction enzyme reaction buffer
① NdeI: an endonuclease isolated from Neisseria denitrificans. In molecular biology, it is commonly used as a restriction enzyme.
② BamHI: a restriction enzyme, d
1.1 연구의 이론적 배경 및 목적
Mary M. Brinig등에 의해 진행된 연구에 의하여 치주질환자에서 TM7이 잘 발견된다고 알려져 있다. University of California, San Francisco(UCSF), School of Dentistry in the Center for Clinical Research(Division of Periodontology)의 46명을 대상으로 진행된 이 연구의 결과에서 TM7이 치주질환자의 Subgingiva