DPPH 라디칼이 감소되는 정도를 Spectrophotometer로 측정하여 간접적으로 시료의 항산화 능력을 측정할수 있다.
*DPPH란?
ㆍ분자식 : C18H12N5O6
ㆍ분자량 : 394.32
ㆍmp : ~135 °C
ㆍ특징
: 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH)는 화학적으로 안정화 된 수용성 free
radical로서 517nm에서 특징적인 광흡수를 나타내는 보라
DPPH와 반응
각각의 농도의 Ascorbic acid 200ul과 DPPH 800ul를 섞어 반응시켰다.
각각의 농도의 Hot 6 200ul과 DPPH 800ul를 섞어 반응시켰다.
OD값 측정(517nm)
DDW을 cuvette에 900ul 넣고 blank값을 측정했다.
Negative sample(DDW 200ul + DPPH 800ul)을 cuvette에 900ul 넣고 측정했다.
Standard값으로 Ascorbic acid+DPPH 용액을 900ul 넣고 측
DPPH) 자유기 소거반응과 지질의 과산화 억제 반응을 통하여 확인하고, 간접적인 항산화적 활성을 항산화 효소의 활성도를 통하여 확인하고자 함이다.
Ⅱ. 실험 재료 및 방법
1. 세포배양
-실험에 사용된 세포는 Chinese hamster lung fibroblast, V79-4 (ATCC CCL-93)세포이며, 30℃에서 가습된 5% CO2/95% O2 배양기에서
radical의 특징을 가져서, dimerise가 일어나지 않는다.
2) 반응 후에 색깔 변화가 뚜렷하다.
DPPH로 산화를 개시 시킨 후 실험하고자 하는 Sample에 의해서 radical에 대한 소거 능력을 측정가능
농도에 따라 색이 보라색->노란색 바뀌고 이를 분광 광도계를 통해 파장이 흡수되는 차이 이용 항산화 측정이 가
1. Comet Assay (Single cell gel electorphoresis assay : SCGE)
1.1. 소개 및 장점
1.1.1. 단세포전기영동법은 방사선을 포함한 암유발원이나 돌연변이 유발원에 의한 DNA손상을 평가하기 위해 개발되었으며, 일명 Comet assay라고 불린다. 이 방법은 1984년 Ostling과 Johanson에 의해 개발되었으며 Singh 에 의해 DNA손상을 보다 민