HRP) 등이 많이 이용되고 있다. 이들 효소는 항체분자의 Fc 지역에 공유결합되도록 화학반응을 이용하여 결합시켜 사용한다.
- ELISA는 1970년 이후 많은 변형이 서로 다른 상황에서 개발 되고 사용되어 왔지만 기본적으로 네 가지 동일한 기본 요소 에 따라 달라진다:
① Coating/Capture: direct or indirect immobil
labeling후
DDW 95µl, 앞의 2Set에는 BSA standard 5µl, 뒤의 2Set에는 샘플 5µl를 넣고
마지막에 Bradford Solution 900µl을 넣고 총량 1ml를 만든다
각각 E-tube를 vortexing후 96 well plate에 200ul씩 넣고 O.D값을 측정한다
측정값을 이용하여 각각의 양에 맞게 protein을 E-tube 2set에 담는다. 그 후 sample buffer
labelling 잘하기
4. Protein lysis buffer(=Honogenizing Buffer)→ deep freezer에서 분주해서 보관 녹여서 cap-tube에 일정량 분주한 후 조직을 넣어 얼음에 5분 정도 꽂아 둔다.
* Protein lysis buffer : Phosphosafe Extraction Reagent (Novagen, Cat#: 71296-3)
* 4mm 혈관 조직 한 개당 90ul 사용 (90ul × 8 = 720ul → 넉넉잡아 10개 조직으로 보고 90
<<첫째 날>>
(1) Sample Preparation
Principle:
• Extraction Buffer(=lysis buffer) : Tris, TritonX-100, NP-40, SDS 등 여러 가지 detergent들이 cell wall과 mitochondria membrane을 깨트려주고 아래의 표에 제시된 protease inhibitors들이 세포 안의 protease가 단백질을 분해하는 것을 막아준다. 추가적으로 phosphatase inhibitor를 넣어 우
< ELISA란? > (indirect ELISA)
:> Enzyme-linked immuno sorbent assasy(ELISA)는 Enzyme immunoassay(EIA)라고도 불린다. 이는 sample안의 antigen 혹은 antibody를 detection하기 위한 immunology를 사용한 biochemical technique이다. ELISA는 diagnostic tool로 사용되고, plant pathology등 여러 산업에서 사용된다.