2) BCA Assat
현제 Bradford Assay와 함께 가장 많이 쓰이고 있는 단백질 정량방법이다. Lowry assay를 개량한 방법으로 Folin시약 대신 bicinchoninate(BCA)를 사용한다는 차이점이 있다. 단백질이 구리 이온Cu 2+, Cu 1+)을 환원 (Reduction) 시킬 수 있는 성질을 이용한다. 단백질에 의해 환원 된 구리 이온은 BCA용액과 반응
다. Amino Acid의 Titration과 pH buffer 작용
Amino Acid를 NaOH와 같은 염기로 Titration을 하여 얻어지는 Titration Curve는 적정하는 Amino Acid의 pH buffer 작용을 잘 설명해 준다.
즉 Amino Acid의 Carboxyl기는 Weak Acid이므로 NaOH-와 같은 Strong Base와 반응하면 일정한 pH 범위 내에서 큰 pH 변화를 일으키지 않는 pH Buffer 작용을 한
4. Bradford Assay
- Bradford Reagent는 95% ethanol, 88% phosphoric acid, Brilliant Blue G로 이루어져 있다. Ethanol은 유기용매이기 때문에 coomassie blue를 Bradford reagent 내에 잘 용해 시키고, phosphoric acid는 reagent가 산성 조건을 충족시키게 한다. 산성 조건 하에서 Coomassie blue는 doubly-protonated red form이 되기 때문에 6개의 phenyl grou
1. Comet Assay (Single cell gel electorphoresis assay : SCGE)
1.1. 소개 및 장점
1.1.1. 단세포전기영동법은 방사선을 포함한 암유발원이나 돌연변이 유발원에 의한 DNA손상을 평가하기 위해 개발되었으며, 일명 Comet assay라고 불린다. 이 방법은 1984년 Ostling과 Johanson에 의해 개발되었으며 Singh 에 의해 DNA손상을 보다 민
Protein Quantity Method
◈ 단백질을 정량하는데 이용하는 spectroscopic 방법
à 단백질의 UV흡수에 따른 측정법
à Lowry assay
à Bradford dye assay
à the Smith copper/bicinchoninic assay(BCA assay)
☞ Lowry assay, Bradford assay, BCA assay는 단백질에 따른
색변화를 일으킨다.
Absorbance at 280nm(A280)
1. 정량 원리