cDNA등 원하는 DNA 분자는 PCR에 의해 손쉽게 증폭이 가능하다. 이러한 많은 장점 때문에 PCR은 여러 분야에서 응용되고 있는데, 예를 들면 세포로부터 어느 한 특정 DNA fragment를 cloning하는 것은 물론이고 바이러스 감염의 초기 식별에 사용되기도 한다. 법의학에서도 폭넓게 응용되는데, 그 이유는 미량의
clone을 확인하고 선택한다.
2. 재조합 DNA
․ 재조합 DNA 기술 정의
기본적으로 재조합 DNA는 두 과정으로 이루어진다.
첫째는 DNA 단편을 플라스미드나 박테리오파지처럼 독자적 복제능력이 있는 적당한 유전인자 운반체(vector)에 연결시켜 주는 일이다. DNA 단편은 자기복제 능력이 없으므로 이것
새로운 DNA의 정보를 알 수 있다. 이러한 성질 때문에 이를 탐침(Probe)라 부른다.
알고자 하는 세포나 조직의 mRNA를 역전사 시켜 얻어진 cDNA를 표적(Target)이라 부른다. 기판에 고정된 단일사슬 DNA들(탐침)과 타겟을 혼성화 시키면 이들 결합에 따른 신호를 통해서 mRNA의 양을 간접적으로 측정할 수 있다.
제한효소에 의해 잘린 DNA들을 분리한다.
2. Principle
1) agarose gel electrophoresis 시 DNA의 이동에 영향을 주는 요인들
a. DNA 분자의 크기가 클수록 느리게 이동한다.
b. Agarose의 농도가 높을수록 느리게 이동한다.
c. DNA 형태에 따라 이동속도가 다르다. 일반적으로 supercoiled DNA > linear DNA > open circular DNA
d. 전압
◈ Observation & Result
Ligased plasmid + 만든 CP Cell
Ligation + 상용 CP cell
Inserted plasmid + 상용 CP Cell
Plasmid only + 상용 CP cell
실험5 Subject Transformant 확인/ LB Broth에 (containing 100μg/ml of ampicillin) transformant를 multiplication
◈ Purpose
전날 만든 transformant가 제대로 배양되었는지 colony를 확인하고, ampicillin을 처리해