Chromosomal DNA 의 구조
: 원핵세포의 chromosomal DNA는 불규칙한 모양으로 핵양체(nucleoid)라는 부분에 모여 있다. 대부분의 원핵세포는 단일한 고리 모양의 이중나선 DNA(deoxyribonucleic acid)를 지니지만 어떤 세균은 선형 DNA를 염색체로 지니기도 한다.
핵양체의 화학조성을 살펴보면 분리된 핵양체 무게에서 60
농도가 동일한 지점, 즉 +NH3 의 pK' 지점이다.
pH가 12 이상에 이르게 되면 모든 Alanine은 Deprotonation 되어 NH2-CHR-COO- 의 상태가 되며 Titration은 종결되게 된다.
이러한 Amino Acid Titration에서 우리가 얻을 수 있는 정보를 요약하면 다음과 같다.
① Amino Acid에 존재하는 2개의 ionizable Group, 즉 Amino 기와 Carboxyl
Amino Acid의 Titration과 pH buffer 작용
Amino Acid를 NaOH와 같은 염기로 Titration을 하여 얻어지는 Titration Curve는 적정하는 Amino Acid의 pH buffer 작용을 잘 설명해 준다.
즉 Amino Acid의 Carboxyl기는 Weak Acid이므로 NaOH-와 같은 Strong Base와 반응하면 일정한 pH 범위 내에서 큰 pH 변화를 일으키지 않는 pH Buffer 작용을 한다는
DNA ladder를 loading하여 DNA size marker로 사용한다.
5. 각각의 tube에 DNA loading buffer(1 μl)와 섞은 후, 각각의 well에 loading 한다. (DNA loading buffer는 agar에 가라앉히는 역할과 파란색 dye로 어디까지 내려왔는지를 알게 해주는 역할을 한다)
6. 75V 전압에서 전기영동을 하여, DNA가 충분히 분리되도록 한다(DNA의 경우