Genomic DNA의 분리
Bacterial cell의 배양물로부터 total DNA를 준비하는 방법은 4단계로 나눌 수 있다. 가장 먼저 bacterial cell 배양물의 증식 및 수확을 한다. 이 방법은 bacteria를 배양한 뒤 centrifugation을 통해 cell의 pallet을 분리한다. 다음으로는 세포 추출물을 분리하는 단계인데 cell의 구성성분 중 필요 없는
clone을 확인하고 선택한다.
2. 재조합 DNA
․ 재조합 DNA 기술 정의
기본적으로 재조합 DNA는 두 과정으로 이루어진다.
첫째는 DNA 단편을 플라스미드나 박테리오파지처럼 독자적 복제능력이 있는 적당한 유전인자 운반체(vector)에 연결시켜 주는 일이다. DNA 단편은 자기복제 능력이 없으므로 이것
genomic DNA와 같은 큰 DNA로부터 원하는 DNA 부분만을 선택적으로 증폭시킬 수 있다. 증폭된 DNA는 일반적으로 agarose gel 전기영동 방법에 의해 쉽게 확인할 수 있게 된다. 또한 PCR에 쓰이는 template는 DNA뿐만 아니라 RNA 모두 이용할 수 있으므로, genome DNA, cDNA등 원하는 DNA 분자는 PCR에 의해 손쉽게 증폭이 가능
genomic DNA와 같은 아주 큰 DNA로부터 원하는 DNA 부분만을 선택적으로 증폭시킨 후 일반적으로 사용되는 agarose gel이나 polyacrylamide gel 상에서 뚜렷하게 보이는 band로 가시화할 수가 있다.
중합효소 연쇄반응을 통하여 in vitro상에서 특정 부위의 DNA를 105∼108배까지 수시간내에 증폭시킬 수 있으며, 이렇게
2. 제한효소(restriction enzyme)에 의한 유전자의 분리
유전자 클로닝은 DNA분자를 아주 정확하고 반복적으로 절단할 것을 요구한다. 각 Vector 분자의 circle을 열어서 새로운 DNA가 삽입될 수 있도록 각 분자마다 하나의 같은 위치가 절단되어야 한다. DNA를 자른다는 것은 nucleotides를 연결하고 있는 phosphodiester b