surface of polystyrene microplate wells.
② Plate Blocking: addition of irrelevant protein or other molecule to cover all unsaturated surface-binding sites of the microplate wells.
③ Probing/Detection: incubation with antigen-specific antibodies that affinity-bind to the antigens.
④ Signal Measurement: detection of the signal generated via the direct or secondary tag on the specifi
10R-1. Microplate에 의한 단백질정량방법을 설명하라.
■Microplate reader는 다양한 colorimetric application에 기본적으로 필요한 장비로, 한번에 하나의 sample값을 측정하는 cuvette type photometer와 달리 well plate단위로 다수의 단백질 정량, ELISA, cell viability / toxicity (MTT assay 등)를 한번에 multidetection mode로 측정할 수 있
surfactant)가 조금이라도 존재하는 경우, 정량 값이 크게 영향을 받게 되는데, 이는 dye로 사용하는 Coomassie blue가 acidic하기 때문이다. 단백질에 따라 Coomassie dye와 결합하는 정도도 조금씩 다를 수 있으므로 주의가 필요하다. 이런 발색을 이용한 단백질의 정량은 시간이 지날수록 결과값이 달라지는 경우가
I. Protein Extraction – Micro Smash MS-100 equipment 사용
<실험 전 준비>
얼음(정사각형 스티로폼), E-tube 총 38개(8개×4세트->extract 옮길 것(sonication), centrifuge 상층액 뜰 것, 정량할 것, western 용/ 6개-> standard곡선 그릴 것), screw tube(cap-tube, 뚜껑 초록색) 8개
1. E-tube에 bead (큰 것 2개, 작은 것 10개) 넣어서 ice-rack에