전기영동은 수크로오스(sucrose) 용액 같은 액체 상태에서 수행되었지만 점차로 발전하여 종이, 셀룰로오스 아세테이트 막, 전분 겔전기영동 등을 사용하다가, 현재까지도 널리 쓰이는 아가로오스와 아크릴아마이드를 이용한 겔, 원판형(disk) 겔, 면역체전기영동(immunoelectrophoresis) 등을 거쳐 isoelectric focus
전기장(electric field)에 놓이게 되면 서로 다른
속도로 이동할 수 있다는 것에 근거하고 있다.
1)전기영동의 원리
완충용액 속에서 거대분자(macromolecule)들은 전하를 띠게 된다. 예를들어 DNA는 음전하
를 띠며 단백질은 용액의 pH가 등전점(pI)보다 높으면(즉, 수소이온의 농도가 낮으면) 음전
하를 띠고
평판(slab)에서 동시에 여러 시료와 표준 물질을 분석 할 수 있는 기법.
Gel의 세공 크기를 조절하여 하전된 물질의 이동속도 결정.
대표적 Gel 물질: Agarose & Polyacrylamide.
Polyacrylamide 농도:3~20% 가능
단백질은 SDS와 polyacrylamide 전기영동(SDS-PAGE)→ 분자량에 따른 분리
PCR 산물의 확인
정제
전기적으로 중성이다. 이렇게 Amino Acid 분자들이 전기적으로 중성이 중성인 지점을 등전점 (Isoelectric Point)이라 하며 등전점은 Amino Acid 의 종류에 따라 틀려지게 된다.
pH가 등전점보다 높은 수치에 이르게 되면 NH2-CHR-COO- 상태의 Alanine이 생성되게 되며 이때 두번째의 buffering pH Region에 도달하게 된다. pH =
Amino Acid의 Titration과 pH buffer 작용
Amino Acid를 NaOH와 같은 염기로 Titration을 하여 얻어지는 Titration Curve는 적정하는 Amino Acid의 pH buffer 작용을 잘 설명해 준다.
즉 Amino Acid의 Carboxyl기는 Weak Acid이므로 NaOH-와 같은 Strong Base와 반응하면 일정한 pH 범위 내에서 큰 pH 변화를 일으키지 않는 pH Buffer 작용을 한다는