이용해서 PCR을 한 경우 원하는 서열 양끝쪽에 overhang으로 추가로 A 서열이 만들어진다. A와 T는 서로 상보적인 결합을 하므로 PCR 결과물의 A서열과 T-vector의 T서열은 서로 상보적인 결합을 하게 된다.
1. plasmid DNA isolation
- plasmid를 GFP를 운반하기 위한 Vector로 사용하기 위해 plasmid DNA를 isolation하여 한
이용한 실험은 Cell line이나 초파리, Zebrafish 수준에서는 Gene targeting을 하는 데에는 높은 효율을 보여주었다. 한 연구에서는 사람에게서 severe combined immune deficiency (SCID)을 일으키는 IL2Rg gene의 결함을 cell line 수준에서 높은 효율로 정상 세포로 복구한다는 결과도 있었다. 또한 ZFN기술을 포유동물에 응용하
5. 실험배경 이론 및 참고사항
* Transformation 과 Transfection의 차이
Transfection은 진핵생물체에 virus vector를 사용하는 것을 말하며, non-viral vector를 사용할 때에는 포유류에 한하여 용어를 사용한다. Transformation이라는 용어는 non-viral vector를 이용하여 bacteria의 형질전환을 시키거나, 비동물성 진핵체 즉, fu
삽입되어 transgenic animal을 형성한다. 이러한 원리를 이용하여 4-8 세포기의 수정란을 회수하여 투명대를 제거한 후 virus를 생산하는 세포와 함께 16-24시간 배양한 후 foster(대리모)에 이식하여 외래 유전자를 가진 동물을 만들어 내는 방법이다.
1) retrovirus DNA integration의 특징
- 높은 효율성을 가진
Escherichia coli는 유전학적 연구가 가장 많이 되어 있는 세균으로서, 조작이 쉬운 장점이 있기 때문에 재조합 DNA을 만들고, 재조합 단백질을 생산하는데 많이 쓰이고 있다. 토양 등 환경의 DNA (metagenome)을 이용하여 유용한 물질을 얻는 목적의 metagenome library를 구축하는 경우에도 유용한 host로 쓰이지만 여