Ⅰ. 전기영동(electophoresis)
-기본적인 개념은 양전하와 음전하는 서로 잡아당긴다는 것이다.
전기적 끌림의 영향으로 더 많은 전하를 가지는 분자는 더 빠르게 움직이지만, 크기가 더 큰 분자를 움직이기 위해선 더 큰 힘을 필요로 한다. 그래서 결과적으로 보면 모든 DNA/RNA 분자들은 같은 속도로 양
Method
M9 plate에서 worm을 S-media(1ml)로 모은 다음 2~3회 washing하고 30min동안 ice에서 bacteria가 모두 소화될 수 있도록 한다.(Bacteria 제거)
한번 더 washing해준다.
5000g에서 30s centrifuge한 후, worm만 남기고 S media는 제거해준다.
2X SDS buffer를 50㎕넣어주고 잘 섞일 수 있도록 pipeting한다
2) Transfer
nitrocelluose, PVDF 및 nylone membrane같은 filter에 transfer하는 방법이다. 이렇게 transfer하는 과정 동안 단백질로부터 SDS가 제거되고 단백질의 구조가 재생되면서 본래의 항원 결정기를 갖게 된다. Transfer되는 과정 동안 이동 효율은 분자량에 달려 있는데 분자량이 작은 단백질은 큰 단백질에 비해 효율
cationic 및 anionic detergent로 다시 나뉘며 이들은 highly denaturant로 monomeric protein으로 단백질을 분리시키는 특성이 있어 Western blot analysis 및 분자량 측정 등에 주로 이용한다. 그리고 Triton X-100과 같은 non-ionic detergent는 less protein denaturant이기 때문에 protein-protein interaction등에 주로 이용된다. 또한 CHAPS 등과
Amino Acid의 Titration과 pH buffer 작용
Amino Acid를 NaOH와 같은 염기로 Titration을 하여 얻어지는 Titration Curve는 적정하는 Amino Acid의 pH buffer 작용을 잘 설명해 준다.
즉 Amino Acid의 Carboxyl기는 Weak Acid이므로 NaOH-와 같은 Strong Base와 반응하면 일정한 pH 범위 내에서 큰 pH 변화를 일으키지 않는 pH Buffer 작용을 한다는