signaling-western blotting을 통하여 세포내 신호전달 기전 확인
분야
hwpWestern blotting
1) SDS-PAGE
2) Transfer
3) 1차, 2차 antibody 처리
4) ECL 현상
Apoptosis 관련 물질
1) Bax sub-family
2) BH3 sub-family
3) Bcl-2 sub-family의 작용
2. 실험결과
3. Discussion
nitrocelluose, PVDF 및 nylone membrane같은 filter에 transfer하는 방법이다. 이렇게 transfer하는 과정 동안 단백질로부터 SDS가 제거되고 단백질의 구조가 재생되면서 본래의 항원 결정기를 갖게 된다. Transfer되는 과정 동안 이동 효율은 분자량에 달려 있는데 분자량이 작은 단백질은 큰 단백질에 비해 효율성이 떨어진다. 이러한 문제는 메탄올을 처리함으로써 소수성 결합을 강화시켜 membrane에 잘 결합하도록 한다.
3) 1차, 2차 antibody 처리
primary antibody
Secondary antibody
Actin
Actin -Rabbit
Bcl-2
Bcl-2 -Mouse
4) ECL 현상
ECL (enhanced chemiluminescence)는 Peroxidase의 기질인 luminol이 peroxidase에 의해 산화되면서 푸른색 빛을 내는 것을 x-ray film상에 감광시키는 방법으로 ng수준의 단백질을 검출할 수 있다.
Apoptosis 관련 물질
Bcl-2 family는 미토콘드리아에 의한 intrinsic apoptosis pathway에 작용하는 단백질로 다양한 종류가 존재한다. Bcl-2 family는 단백질의 종류에 따라 apoptosis를 일으키기도 하고 anti-apoptosis를 하기도 한다.
Bcl-2 family의 종류와 작용
