실험방법
sample tissue 을 microtube에 넣고, 100 µL 2X CTAB 용액 첨가한 후,
plastic pestle을 이용하여 갈아준다.
위 microtube에 600 µL 2X CTAB 용액 더 넣고 섞은 후,
(Add β mercaptoethaol final cons. 1%) 75℃에서 30분간 반응시킨다.
(final volume 700 µL)
온도를 실온까지 낮춘 뒤, 같은 부피의 chloroform을 넣
CTAB의 경우
: 입자의 크기가 크고 구형을 띈다.
DTAB의 경우
: 표면이 거칠고 입자의 크기가 CTAB에 비해 작다. CTAB의 입자가 구형인 것에 비하면 울퉁불퉁하다.
이번 실험의 경우 SEM의 배율이 2배밖에 되지 않아서 정확하게 비교가 힘들고 동일한 조건 하에서 DTAB은 CTAB보다 결정화가 이루어지지 않으
CTAB
(Cetyltrimethylammonium bromide, C19H42NBr)
-DNA의 유전자를 분리
-박테리오파지와 플라스미드의 DNA를 분리
-본 실험에서는 유화제로 사용 됨
CTAB의 경우가 큰 입자 보임
계면활성제의 길이게 따라
다른 크기의 micelle 형성하기 때문
CTAB(1μm) > DTAB(1nm)
파쇄시킨다.
→식물은 세포벽을 갖고 있어 세포벽을 파쇄하여야 세포 내 내용물이 나와 DNA 추출이 가능하다. 이를 위해 액체질소를 이용하여 막자사발로 식물조직을 분쇄하는 것이다.
③ 파쇄한 즉시 약수저를 이용하여 50mL tube에 약 0.5g을 넣고 즉시 준비된 추출용액(CTAB buffer) 10mL를 넣는다.