[유전학] 진핵 생물의 DNA 분리

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레포트 > 자연계열
2012.08.30
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소개글

[유전학] 진핵 생물의 DNA 분리에 대한 자료입니다.

1.실험목표
2.실험배경
3.원핵 세포 VS 진핵 세포
4.식물의 Genomic DNA의 분리 단계
5.Genomic DNA의 분리
6.CTAB(cetyltrimethylammonium bromide)
7.실험방법
8.실험결과

본문내용

실험방법
sample tissue 을 microtube에 넣고, 100 µL 2X CTAB 용액 첨가한 후,
plastic pestle을 이용하여 갈아준다.
위 microtube에 600 µL 2X CTAB 용액 더 넣고 섞은 후,
(Add β mercaptoethaol final cons. 1%) 75℃에서 30분간 반응시킨다.
(final volume 700 µL)
온도를 실온까지 낮춘 뒤, 같은 부피의 chloroform을 넣고 원심분리기 (5000rpm, 5min)를 이용하여 층을 분리시킨다. 상층액 450~500ul 따서 새 microtube에 옮긴 후 한번 더 같은 부피의 chloroform을 넣고 원심분리하여 상층액 250~300ul를 새 microtube에 옮겨 다당류와 단백질을 제거한다.
같은 부피의 Isopropanol를 넣고 pulse voltexing하여 원심분리기(12000rpm, 10min)를 이용하여 DNA를 침전시킨다.
cold 70% 에탄올을 넣고 원심분리 하여(5000rpm, 5min) DNA pellet을 씻어준 후, 에탄올을 최대한 제거하여 실온에서 말린다.
(DNA pellet이 다 마르면 투명해진다.)
H2O (100ul)를 첨가하여 DNA pellet을 녹인다.

#DNA #유전학 #진핵 #분리 #생물

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