metagenome에 대하여 1-3 과 2-3 조합으로 나누어 시행하였다.
- (3조) metegenome의 gene에서만 CODH가 검출되었으므로 그것을 template로 하여 16S rDNA sequence실험을 진행하였다.
- (lane 8)1.5kb 부근에서 흐릿하게 band가 확인되었다. (16S rDNA는 1541bp)
7. Discussion
-CODH 검출실험에서 lane 11~14에서 no band인 이유
Introduction
어떤 생물의 특정한 유전자를 제한효소를 이용하여 잘라서 이 DNA 조각을 세균세포내에 도입하여도 그 유전정보는 발현될 수 없다. 이는 도입된 DNA 단편이 세균세포내의 효소에 의해 분해되거나 그렇지 않으면 세균의 분열과 함께 증식하지 않고 희석되어 소실되기 때문이다.
그러므로
bpDNA ladder를 loading하여 DNA size marker로 사용한다.
5. 각각의 tube에 DNA loading buffer(1 μl)와 섞은 후, 각각의 well에 loading 한다. (DNA loading buffer는 agar에 가라앉히는 역할과 파란색 dye로 어디까지 내려왔는지를 알게 해주는 역할을 한다)
6. 75V 전압에서 전기영동을 하여, DNA가 충분히 분리되도록 한다(DNA의 경
and leaves a sticky end. One of the earlier enzymes to be used, it is popular for historical reasons, but also because digestion leaves a GATC overhang compatible with many other enzymes. Persistent issues with this specific enzyme spontaneously failing to generate cloneable fragments necessitate aliquoting prior to use. Engineered variants of the enzyme have been created in order to avoid star a
HGU
◇ Date: 20000. 00. 00 월요일
◇ Subject : DNA sub-cloning 1단계
◇ Principles
Plasmid: Bacterial cell 내에 염색체와는 독립적으로 존재하며 독자적으로 증식할 수 있는 Circular DNA로 세균의 생존에 필수적인 것은 아니다. Plasmid는 대부분 하나 이상의 유전자를 가지고, 이들 유전자는 종종 Host bacteria에 의해 나