◎ Date – 2011.04.06 (Wed)
◎ Principle
1. HPLC (High Performance[Pressure] Liquid Chromatography)란 무엇인가?
이동상에 액체를 쓰는 액체 크로마토그래프의 일종으로 고압 LC(high pressure LC), 고성능 LC 등으로 말하는 경우도 있다. 보통 HPLC로 불리며 액-액, 액-고, 이온교환, 겔 침투 크로마토그래피 4종류로 분류
1. 서 론
1.1 크로마토그래피(Chromatography)
크로마토그래피는 chromos(color)와 graphein(write)의 합성어, 즉 색을 통해 분석하는 것으로, 혼합물(mixture)의 분리 방법 중 하나이다. 다른 혼합물 분리 방법 중 하나인 추출(extraction)과 같은 원리로 시행되지만, 하나의 상(phase)은 다른 하나의 상이 지나가는 동안 고정
elution
단편해석(base sequencing)
Southern & Northern blot 해석
Agarose gel로부터 DNA fragment를 자른다.
2. 1.5ml microcentrifuge tube 에 gel slice를 넣어 무게를 재고 QG buffer를 gel 무게의 3배만큼 첨가.
3. 50도에서 10min incubate, incubation 동안 매 2~3분마다 vortexing 하면서 mix
4. Sample에 gel volume의 동령으로 iso-propanol 첨
가. 크로마토그래피의 정의
(1) 크로마토그래피는 크기, 전하, 흡착성 또는 생물학적 친화성(affinity)의 차이에 근거를 두고 미세한 입자를 충전시킨 컬럼을 통하여 유체를 균일하게 침투 통과시키는 과정에서 유체내 어떤 성분이 선택적으로 지연되어 결과적으로 물질이 분리되는 것을 말한다.
나.
의미한다.
정지상에 의하여 약하게 흡착된 성분들은 이동상의 흐르는 방향을 따라 더 빠른 속도로 정지상을 통과하게 되고 각 성분들은 서로 다른 이동 속도에 따라 분리된다. 이러한 조작을 용리(elution)이라고 하며 용리 시간에 대한 검출기의 감응을 나타내는 그래프를 크로마토그램이라고 한다.
고전적인 SELEX의 경우 합성을 통한 압타머 라이브러리를 구축하고, 해당 라이브러리를 표적 물질이 코팅된 비드에 노출하여 결합 능력을 가진 압타머의 결합을 유도하는 것으로 시작된다. 다음으로, 압타머가 결합된 비드 (bead)만을 선별적으로 취한 후, 압타머를 다시 분리 (elution)하여 회수한다.
되어 있는 solute와 column으로 가해준 eluting solvent 사이에 equilibrium이 형성된다. Mixture에 포함되어 있는 각각 다른 component들은 stationary, mobile phase에 대한 interaction차이로 mobile phase를 따라 이동하면서 분리가 일어나게 된다. 각각의 component들은 column 바닥에서 떨어지는 solvent drip으로 collection 된다.
Chromatography I
1980년 소련의 식물학자, 생화학자 Tswett
식물의 잎사귀에 존재하는 색소를 분리시도
Inulin등의 여러 흡착제를 충진시킨 column에 petroleum ether로 추출한 잎사귀 추출액을 소량 가하고 동일 용매로 용리 (elution)시켰을 때 서로 다른 색깔의 띠를 확인
희랍어어원 color + write = chromatography