분야
pptxPCR
(Polymerase Chain Reaction)
PCR의 목적 : 원하는 DNA 증폭
PCR 실험 전 준비물
재료
필요한 양
DW
36λ(1㎕=1λ)
Buffer
5λ
dNTP
5λ
Templete
1λ
Primer F
1λ
Primer R
1λ
Enzyme(Polymerase 중합효소)
1λ
PCR의 원리
Denaturation : 온도상승 -> DNA 두 가닥으로 분리
(원리 : 열에너지가 증가하게 되면 분자운동 증가로 인해서 이중나선을 유지 혹은 안정화시키는 수소결합 및 다른 상호작용이 파괴)
Primer의 annealing : Primer가 붙기 위해 온도를 낮춘다.
Extension : Polyemerase 활성
실험은 위의 cycle을 30번 반복하면 끝난다.
PCR Product Purification
PCR Purification의 목적 : 순수한 DNA를 검출하기 위해
PCR Purification의 과정 및 재료
PCR product Checking (PCR에서 DNA가 증폭됬는지 확인하기 위해)
Ethanol Down
step1)
재료
필요한 양
6X Orange G
1λ
PCR product
5λ
재료
필요한 양
3rd DW
155λ
Chloroform(단백질 녹임)
200λ
PCR product
45λ
