소개글
[생물학실험] 그람염색법(Gram Stain)에 대한 자료입니다.
본문내용
염색 방법은, 먼저 열고정한 세균을 염기성 색소인 크리스탈 바이올렛(crystal violet)으로 염색한다. 이 색소는 그람 양성과 그람 음성균 모두를 염색하기 때문에 primary stain이라고 한다. 조금시간이 지나고 보라색 염색약을 씻어내고 iodine을 가해주면 크리스탈 바이올렛과 iodine이 반응하여 세포내에 불용성의 복합체인 Crystal Violet - Iodine (CV-I)가 형성되어 착색(매염)된다. 이 때 그람 양성과 그람 음성균 모두 자주색이나 보라색으로 보이게 된다. 그 다음에 alcohol이나 alcohol-acetone (decolorizing agent) 으로 씻어내면 착색된 CV-I 복합체가 용해되는데, 어떤 것은 보라색이 씻겨 나가서 백색으로 보이고 어떤 것은 보라색이 그대로 남는다. alcohol을 씻어내고 분홍색의 염기성 색소인 safranin으로 염색을 하면 보라색이 씻겨나가서 백색으로 보였던 세균에 분홍색이 염색된다. 여기서 decolorizing agent에 의해 탈색되지 않아 보라색으로 염색된 균을 그람 양성균이라 하고, 탈색된 뒤 safranin으로 염색된 균을 그람 음성균이라 한다. 여기에서의 양성과 음성은 전기적 성질과는 무관하며 단순히 형태학적 차이를 나타내는 용어이다. (ref. 1)
그람양성균과 음성균이 서로 다르게 염색되는 것은 근본적으로 세포벽 구조가 다르기 때문이다. 세균의 세포벽은 크기와 형태를 유지하게 하며 또한 삼투압에 의한 세포 파열을 방지하는 역할을 한다. 세포벽에는 펩티도글리칸(peptidoglycan) 이라고 하는 물질이 있기 때문에 아주 단단하다. 그람 양성균은 80~90%의 펩티도글리칸층이 두껍게 감싸고 있기 때문에 굵은 펩티도글리칸층 안에서 굵은 입자인 CV-I를 형성하기 때문에 세포벽을 빠져나오지 못해 decolorizing agent 로 쉽게 탈색되지 않게 되는 것이다. 반면, 그람 음성균의 세포벽은 약 10~20%의 펩티도글리칸으로 이루어졌으며 한 겹으로 매우 얇다.
참고문헌
1. Microbiology Person Education by Tortora p.69~71 & Microorganisms in our world Mosby by Ronald M. Atlas p.36
2. http://kin.naver.com/open100/db_detail.php?d1id=11&dir_id=110204&eid=EdDqzvPZJnmqYRNpiL7hYnyqyMwxGSTO
3. http://kin.naver.com/open100/db_detail.php?d1id=11&dir_id=110204&eid=EdDqzvPZJnmqYRNpiL7hYnyqyMwxGSTO
그 외. Microbiology /Pearson Benjamin Cummings/ pp 83~85
http://hankukm.com.ne.kr/GramStain.htm
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