[분자생물학실험] Sudan black B staining(선충의 지방세포관찰)
![[분자생물학실험] Sudan black B staining(선충의 지방세포관찰)-1](http://images.happyhaksul.com/thumb/498/497102-0001.gif)
![[분자생물학실험] Sudan black B staining(선충의 지방세포관찰)-2](http://images.happyhaksul.com/thumb/498/497102-0002.gif)
![[분자생물학실험] Sudan black B staining(선충의 지방세포관찰)-3](http://images.happyhaksul.com/thumb/498/497102-0003.gif)
분야
hwp1. 실험 목표 및 배경지식
실험 목표(PURPOSE)
배경지식
-Sudan Black B Staining
2. 실험재료 및 실험방법
Materials
Method
3. 결과
4.고찰
5.참고문헌
unstarved plate에서 자란 worm을 1ml의 S media로 washing해서 모은다.(미리 비만억제처리/4마리씩)
S media로 2~3회 정도 washing 한다.(bacteria 제거)->600g 으로 centrifuge(먹이를 씻어줌)
S media에 30분 정도 담가두어(얼음에-선충이 계속 벽을타고 올라오는 것을 방지) 창자에 있는 bacteria도 제거한다.(장에소화된것까지 나오도록)
centrifuge(600g)한 후, S media 로 한 번 더 washing 한다.(박테리아가 떠내려간다.)
final concentration 1%에 해당하는 4%의 paraformaldehyde(PF)stock을 넣고 잘 섞어준 다.
LN2에 얼렸다가 녹인다. 1분 간격으로 3회 정도 반복한다.
10min 동안 얼음에 놓아둔다.
fixed한 worms를 500㎕의 cold PBS로 2번정도 washing 한다. (1000g->2min centrifuge)25% ethanol 50㎕fh 2min dehydration한 후 60%, 70% ethanol로도 동일하게 수행한다.(PBS는 체액농도와 같기에 다르면 변형되므로 안정하기위해 이것을 사용한다.)/(탈수는 점점늘려야 효과적이다.)
ethanol을 제거하고 50㎕의 Sudan Black B Solution을 넣는다.
http://en.wikipedia.org/wiki/Sudan_stain
http://www.loci.wisc.edu/optical/ows.html
