[분자생물학실험] 이중 돌연변이 검증
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분야
hwp1. 서론
2. Material
3. 실험 방법
4. 실험결과
5. 고찰
6. 참고 문헌 및 출처
◉ 이중 돌연변이 제작
① NGM 배지
② single 돌연변이 c.elegans
- RB1104(hsp3)과 RB1600(tub-1)
◉ PCR
① 10 x PCR buffer
- 100mM tris, 500mM KCl, 15mM MgCl2 (pH 8.3)
② dNTP mixture
- dATP, dTTP, dGTP, dCTP 의 혼합물로써 extesion 과정에서 template strand를 바탕으로 complement strand를 합성할 때 base pair를 위하여 필요.
③ primer : 2쌍이 필요
- tub1 에 대한 정방향과 역방향
- hsp3 에 대한 정방향과 역방향
④ Taq polymerase
3. 실험 방법
◉ 이중 돌연변이 제작
① 두 개의 돌연변이 주를 각각 관찰하여, 수컷과 자웅 동체를 구별한다.
- 웅체의 꼬리 쪽이 자웅동체에 비하여 가늘고 털 같이 보이는 것이 달려있음을 이용하여 현미경으로 관찰하여 구별한다.
② 웅체가 더 많이 존재하는 돌연변이 주를 선택하여, 웅체만 선별하여 새로운 배지에 옮겨준다. 다른 쪽 돌연변이 주에서는 자웅동체를 취하여 옮겨준다. 이 때 웅체와 자웅동체간의 mating을 유도해야 하므로 웅체의 개체수를 자웅동체의 수보다 많게하여 넣어준다.
- 우리 조의 경우는 RB1104에서 웅체를 취하고, Rb1600에서 자웅동체를 취하였
- “C. elegans를 이용한 기능유전체학 ; 기능과 전망”
남승희, 이준호 (연세대학교 생물학과 발생학 연구실)
