DNA를 isolation하는 방법 중 alkaline method를 사용하였다.
세균에서 plasmid DNA를 추출하기 위한 방법은 배양된 세균을 centrifuge 한 후, Solution I, II, III를 넣어서 DNA를 분리 한다.
●Solution I
50mM Glucos ,25mM Tris-Cl, 10mM EDTA로 구성되어 있고, 세균을 resuspension 시키기 위해 사용하며 세포 표면을 약화 시킨다. Glucos
DNA를 자르는 제한효소와 잘라낸 DNA를 연결하는 유전자부위를 잘라내 체외로 분리한 다음 이를 다른 유전자와 재조합해 다른 세포에 도입, 발현시키는 기술이다. 재조합된 유전자를 생물체에 삽입하는 방법으로는 아그로박테리움법, 원형질세포법, 입자총법이 있다.
2. 유전자 재조합 기술의 특징
세포는 물론 생식세포 단계에서도 유전자 이상을 치료
2. 환경정화(환경 오염 저감)
① 미생물을 이용한 채광작업
② 생물연료 생산
③ 미생물에 의한 플라스틱 생산
④ 생물을 이용한 유해물질 정화(예: Phytoremediation)
⑤ 생물농약
3. 식량(현재 GMO로 지칭되는 것들)
① 유전자 변형 농산물
② 유
실험5 Subject Transformant 확인/ LB Broth에 (containing 100μg/ml of ampicillin) transformant를 multiplication
◈ Purpose
전날 만든 transformant가 제대로 배양되었는지 colony를 확인하고, ampicillin을 처리해서 원하는 gene이 제대로 inserted된 것인지 아니면 self-ligated plasmid인지 확인한다.
◈ Principle
형질전환된 세포의 선별
예