형질전환 조건
한 박테리아에서 다른 박테리아로의 DNA 이동을 위한 형질전환이 일어나기 위해서는 수용자 박테리아는 일시적으로 수용 가능한 상태(a state of competence)로 존재해야 하는데 자연계에서는 기아(starvation)나 세포 밀도(cell density)와 같은 환경적 변화로 인해 유도될 수 있고, 혹은 실험실에서
일반적으로 시료를 원하는 양만큼 확보하기가 쉽지 않다. 이를 해결하기 위해 특정 DNA의 단편을 벡터(vector)로 불리는 원형 DNA에 삽입하여 박테리아를 매개로 하여 복제를 통해 거의 무한으로 원하는 DNA를 얻을 수 있는데, 이러한 기술을 유전자 클로닝이라고 한다.
유전자 클로닝의 단계는 다음과 같
사용하였다.
세균에서 plasmid DNA를 추출하기 위한 방법은 배양된 세균을 centrifuge 한 후, Solution I, II, III를 넣어서 DNA를 분리 한다.
●Solution I
50mM Glucos ,25mM Tris-Cl, 10mM EDTA로 구성되어 있고, 세균을 resuspension 시키기 위해 사용하며 세포 표면을 약화 시킨다. Glucos는 cell의 삼투압 유지하는 역할을 한
transformant colony 확인
2. 3개의 Round bottom tube에 labeling한 후 LB Broth media(with 100μg/ml Ampicillin) 3ml씩 넣어준다.
3. Plate에 생긴 ‘ligation+우리가 만든 CP cell’의 colony를 3~5개 정도 유성펜으로 plate 표면에 동그랗게 표시한 다음 pipette에 tip을 끼워서 표시한 colony를 tip 끝으로 덜어낸다.
4. colony를 덜어낸 tip을 LB
실험은 이러한 세포의 분열 과정을 관찰하는 것이다. 현미경을 사용하여 세포의 모습을 관찰한다. 물론 세포가 어떤 분열을 하는가에 따라, 그리고 분열의 어떠한 과정에 있는가에 따라 관찰할 수 있는 세포의 모습이 달라진다. 먼저 체세포분열은 생식세포가 형성될 때에 일어나는 감수분열 이외의 보