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![[생물학실험][서울대]형질전환-8](http://images.happyhaksul.com/thumb/193/192899-0008.gif)
분야
hwp2. Materials and Methods
3. Result
4. Discussion
5. Reference
(1)Materials
Echerichia coli, plasmid DNA, LA agar plate, LB Broth, 마이크로 피펫, 소형 원심분리기, water bath, 회전식 교반기, E-tube, Ice, Spreader
(2)Methods
1. competent cell을 얼음에 꽂아두고 완전히 녹인다.
2. 한 tube에는 competent cell 20㎕에 vector DNA 2㎕를 가하여 섞고, 나머지 한 tube에는 DNA를 넣지 않는다. DNA를 넣어준 뒤 가볍게 tapping하여 넣어 준 DNA와 competent cell이 잘 섞이도록 한다.
3. 이 혼합물을 42℃ water bath 에서 90초간 놓아둔다. 그 다음 얼음에 옮겨 1~2분간 놓아둔다.
4. LB 배지 800㎕를 각 튜브에 넣어 37℃ water bath에서 약 45분간 배양한다.
5. Ampicilin이 포함된 LB인 LA agar plate에 100㎕를 떨어뜨린 후 spreader로 골고루 펴서 말린다.
6. plate를 뒤집어서 37℃에서 배양한다. 12~16시간 후에 콜로니 형성 여부를 관찰한다.
*주요 실험 재료 및 용어 정리
1. Competent cell
- E.coli를 포함한 대부분의 박테리아는 일반적인 환경에서 극히 제한된 양의 DNA만을 받
아 들인다. 이러한 종류를 효과적으로 transformation 시키기 위하여 박테리아는 DNA를 받아들이는 능력을 향상시키는 물리적, 화학적 형태의 처리가 필요하다. 정상적인 박테리아 cell에 이러한 물리적, 화학적 처리를 하여 외부의 DNA가 잘 들어갈 수 있도록 만든 cell을
competent cell이라고 한다.
민철기, 일반생물학실험서, 라이프사이언스, 1998.
Purves et al., Life the science of biology-sixth edition, 교보문고, 2005.
www.google.com
http://blog.naver.com/mima99
레폿 성적으로 A+받았습니다.
참고하시고 도움되시길 바랍니다.
번거롭지 않게 한꺼번에 다운받고자 하는 학우들을 위해
한 학기 동안 작성한 10개의 레폿을 압축하여 올려놓기도 하였으니 참고하시길 바랍니다.
(Discussion이 3장 정도 됩니다.)
