[식물생명과학] RcBr의 유전자 발현

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레포트 > 자연계열
2010.11.01
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소개글

[식물생명과학] RcBr의 유전자 발현에 대한 자료입니다.

Ⅰ. 서론 (Introduction)

1. DNA [deoxyribonucleic acid]

Ⅱ. 실험재료 및 방법 (Materials and Methods)

1. 실험 재료

2. 실험 방법

1) 전체 RNA 분리, gel 만들기

2) cDNA 합성

3) RT-PCR 및 전기영동

Ⅲ. 결과 (Results)

1. 추출한 RNA 농도와 순수도 측정.

2. RT-PCR 수행 후 전기영동 확인.

Ⅳ. 논의 (Discussion)

Ⅴ. 참고문헌

본문내용

PCR
중합 효소 연쇄 반응(PCR: Polymerase Chain Reaction)은 DNA의 원하는 부분을 복제·증폭시키는 분자생물학적인 기술로, 대장균이나 효모 같은 생물을 쓰지 않는 방법이다. 이 기술은 사람의 게놈과 같은 매우 복잡하며 양이 지극히 미량인 DNA 용액에서 연구자가 원하는 특정 DNA 단편만을 선택적으로 증폭시킬 수 있다. 또한 증폭에 필요한 시간이 2시간 정도로 짧으며, 실험 과정이 단순하고, 전자동 기계로 증폭할 수 있기 때문에, PCR과 여기서 파생한 여러가지 기술은 분자생물학, 의료, 범죄 수사, 생물의 분류 등 DNA를 취급하는 작업 전반에서 지극히 중요한 역할을 담당하고 있다. 1984년에 캐리 멀리스(Kary Mullis)가 특정 DNA 서열을 증폭하기 위한 방법을 고안하여 중합 효소 연쇄 반응(Polymerase Chain Reaction)이라고 불렀다. 1985년에 중합 효소를 클레나우 중합 효소(Klenow polymerase)로 사용하는 PCR이 처음 공식적으로 발표됐다. 클레나우 중합 효소는 열에 약했기 때문에 매 주기마다 효소를 새로 넣어 주어야 했고 생성물의 최대 길이는 400bp에 불과했다. 1988년에 DNA 중합 효소로 Thermophilus aquaticus라는 미생물의 DNA 중합 효소인 Taq를 사용한 논문이 발행되었다. 열에 강한 이 중합 효소는 PCR의 효율을 월등히 끌어올렸다. PCR에는 일련의 세 개의 단계가 있고 30~40회 정도 반복된다. PCR의 첫 번째 단계는 DNA를 변성(Denaturation)시키는 것이다. 두 가닥의 DNA는 가열함으로써 분리시킬 수 있다. 분리된 각각의 DNA는 주형(Template)으로서 역할을 하게 된다. 변성 온도는 DNA 내에 있는 G+C의 양과 길이에 따라 달라진다. PCR의 두 번째 단계는 어닐링(Annealing)이다. 이 단계에서는 시발체(Primer)들이 주형 DNA에 결합을 하게 된다. 어닐링 온도는 반응의 정확성을 결정하는 중요한 요소인데 만약 온도를 너무 높게 하면 시발체가 주형 DNA에 너무 약하게 결합되어서 증폭된 DNA의 산물이 매우 적어진다. 또 만약 온도를 너무 낮게 하면 시발체가 비특이적으로 결합하기 때문에 원하지 않는 DNA가 증폭될 수 있다. PCR의 세 번째 단계는 신장(Extension)단계이다. 이 단계에서 열에 강한 DNA 중합 효소가 주형 DNA에서 새로운 DNA를 만들게 된다. PCR은 DNA, RNA 그리고 단백질 수준의 PCR로 나뉠 수 있다. 보통 유전자를 얻는 실험을 할 경우, 그 유전자의 전체를 보려는 것이 아닌 유전자 안에서의 특정 유전자를 관찰하는 것이 목적이다. 하지만 DNA를 바로 PCR하게 되면 특정 유전자를 얻기 힘들고 진핵 생물의 경우, 비발현부위(인트론; Intron)가 같이 나오는 등 여러 가지 문제점이 있다. 그것을 해결하기 위해 특정 유전자에 시발체를 붙인 다음, PCR을 DNA수준이 아닌 RNA나 단백질 수준에서 하는 역전사-PCR 즉 RT(Reverse Transcriptase)-PCR이 있다.

Ⅱ. 실험재료 및 방법 (Materials and Methods)
1. 실험 재료

참고문헌

Ⅴ. 참고문헌
http://ko.wikipedia.org/wiki/PCR
http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_workshop/PCR.php
http://blog.naver.com/lmsgood01?Redirect=Log&logNo=20043971434
http://blog.naver.com/agelf?Redirect=Log&logNo=140047338002

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