소개글
[분자생물학실험] 타우린과 스트레스 저항성에 관한 실험에 대한 자료입니다.
목차
목 차
1. 서론
2. Material
◉ protein 준비
◉ SDS PAGE
◉ Detection
3. 실험 방법
◉ protein 준비
◉ SDS PAGE
◉ Detection
4. 실험 결과
5. 고찰
※ 보충실험 - 개체수의 비교
6. 참고 문헌 및 출처
본문내용
3. 실험 방법
◉ protein 준비
1) plate에서 S media 1ml로 worm을 모은 다음 2~3회 워싱 한다.
2) ice에서 20분간 bacteria가 모두 소화 될 수 있도록 한다.
- ice에서 하는 이유는 worm의 필요 없는 활동은 가능한 억제한 채로, 소화만 이루어질 수 있도록 하기 위함.
3) 5000g에서 30초간 centrifuge 한 후, worm만 남기고 s media는 제거함.
4) 2 x SDS buffer를 50㎕ 넣어준 후, pipeting하여 잘 섞어준다. 그 상태로 vortexing하고, 다시 ice에서 30분간 방치한다.
5) 4℃, 10000g에서 centrifuge한 후에 상층액을 새로운 tube에 옮긴다.
6) 추출한 protein과 1 x SDS buffer 와 4 x dye를 섞어준 후 4분간 끓인 다음, spin down.
◉ SDS PAGE
Separating gel (5ml)
Stacking gel(3ml)
H20
1.9ml
H20
2,lml
30% acrylamide mix
1.7ml
30% acrylamide mix
0.5ml
1.5M Tris (pH 8.8)
1.3ml
1.0M Tris (pH 6.8)
0.38ml
10% SDS
0.05ml
10% SDS
0.03ml
10% APS
0.05ml
10% APS
0.03ml
TEMED
0.002ml
TEMED
0.003ml
1) Gel 을 제작한다.
참고문헌
6. 참고 문헌 및 출처
- 엘피스 바이오텍 홈페이지 (http://www.elpisbio.com/)
- http://www.cytographica.com/
- 논문 : “ Western Blotting 완전정리 ”