실험보고서 - Plasmid DNA Purification
분야
hwpPlasmid는 bacteria 세포의 염색체와는 별도로 존재하면서 self-replication을 할 수 있는 원형 DNA 분자로 적은 수의 gene을 가지고 있다. 이 plasmid는 유전자 재조합 시 재조합 DNA 조작을 위한 vector DNA(숙주에 이종의 DNA를 운반하는 DNA)로 사용되며 원하는 DNA 단편을 넣어 gene cloning 등에 널리 이용된다.1) Plasmid는 주로 대장균 세포에서 증식되며 vector DNA로 사용되기 위하여 대량 증식된 대장균 세포로부터 분리하여 사용하게 되는데 대장균 세포내에서 염색체와는 별도로 존재하기 때문에, plasmid DNA 분리는 염색체 DNA가 포함되지 않게 분리하는 방법이 사용되게 된다. 이러한 분리 방법 중 널리 사용되는 방법 중 하나가 Alkaline Lysis법이다. Alkaline Lysis법이란 높은 pH의 알카리성 anionic detergent용액을 이용하여 대장균 세포를 lysis 시키고 plasmid를 염색체 DNA와 구분하여 분리하는 실험법으로 그 원리는 다음과 같다. Alkaline Lysis법에서는 높은 pH의 alkaline 용액 상태에서 염색체와 plasmid의 크기 및 topology에 의하여 염색체와 혼합된 상태로부터 plasmid만 분리하게 된다.
2) Birnboim, H.C. and Doly, J. A rapid alkaline extraction procedure for screening recombinant plasmid DNA. Nucleic Acids Research 7, 1979, p.1513-1523
3) Joseph Sambrook, David W. Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001, p. 1.31-1.42, p.5.4-5.39
