DNA로는 힘들다. 더구나 intron sequence는 일부를 제외하고는 중요성이 떨어진다고 인식되어 밝히지 않은 것이 많아 GenBank에서도 찾을 수 없는 경우가 많다. 이러한 이유 때문에 mRNA를 template로 해서 PCR하는 방법을 RT-PCR(Reverase Transcriptase-Polymerase Chain Reaction)이라고 합니다. 이 경우는 앞에서 설명한 PCR을 시
DNA는 서로 반대 방향으로 구성되어 있다.
Central dogma(중심원리)
유전정보가 DNA에서 RNA로 다시 단백질로 일방적 흐름에 따라 전달된다는 원리이다.
복제(replication) : 원본 DNA를 새로운 두 DNA로 만드는 과정이며, DNApolymerase 가 역할을 수행한다. 복제는 반드시 5‘→3’로 진행된다.
1. DNA의존 RNA 합성
가. DNA 의존 RNA 폴리머레이즈(DNA-dependent RNA polymerase)
① DNA 의존 RNA폴리머레이즈는 본틀, Mg²⁺, NTP(UTP포함)이 필요.(Zn²⁺와도 결합함)
② dsDNA와 결합했을 때 가장 활성이 높다.
③ 개시를 하기 위한 시발체를 필요로하지 않는다.
④ 헬리케이즈 활성이 있어 이중
DNA 합성이 가능하다. 또한 큰 DNA로부터 원하는 부분만을 선택적으로 증폭시킨 후 agarose gel에서 전기영동하여 뚜렷하게 볼 수 있는 band로 가시화 할 수 있다.
□ Principle:
PCR cycle은 3단계로 구성된다.
① Denaturation: 95℃에서 double strand DNA를 single strand DNA로 분리시킨다. 우리가 사용하는 polymerase는 Taq라
1. 실험 목적(Purpose of experiment)
(1) 쥐의 근육세포에서 DNA를 추출하여 중합효소 연쇄 반응(polymerase chain reaction, PCR) 실험에 이용할 product를 만든다.
(2) 지난 11주차에 추출한 DNA의 PCR결과를 전기영동을 통해 확인한다.
2. 배경지식(Background knowledge)
1-1. DNA의 기능
세포의 핵내에 존재하는 유전
DNA의 양끝에 overhang(DNA가 2가닥인데 한가닥만 돌출되어있다)으로 T서열을 가지고 있다. 이렇게 양끝에 T를 넣어준 이유는 Taq polymerase(PCR용 DNA중합효소)를 이용해서 PCR을 한경우 원하는 서열 양끝쪽에 overhang으로 추가로 A 서열이 만들어지기 때문이다. 이 상태의 DNA를 연결ligation하여 변형transformation 시킨
Polymerase Chain Reaction : 중합효소 연쇄반응(polymerase chain reaction, PCR)은 특정 DNA 부위를 특이적으로 반복 합성하여 시험관내에서 원하는 DNA 분자를 증폭시키는 방법으로서, 아주 적은 양의 DNA를 이용하여 많은 양의 DNA 합성이 가능하므로 분자 생물학적으로 제한효소의 발견만큼 획기적인 것이라고 할 수 있
※ 중합효소 연쇄반응(polymerase chain reaction, PCR) 이란?
▶ 중합효소 연쇄반응은 현재 유전물질을 조작하여 실험하는 거의 모든 과정에 사용하고 있는 검사법으로, 검출을 원하는 특정 표적 유전물질을 증폭하는 방법이다.
※ 원리
▶ 1. 열을 이용하여 두 가닥의 DNA를 분리하는 열변성 과정(denaturation
실험의 동기 및 의의
PCR보다 높은 검출능률
SERS
High Sensitivity
High Selectivity
Multiple Color Scanning
Distinguish target DNA
Multiplexed Detection
Background Knowledge
First
Surface Enhanced Raman Scattering
Second
Polymerase Chain Reaction
Third
Flat bed Scanner