유전자의 수는 두 배가 되자 않는다. 밀의 genome은 16000Mbp로 애기장대의 128배, 인간의 5배 이상이고 많은 유전자가 세 개의 복제이다. 이러한 작물의 genome은 돌연변이 유전자 좌위를 분리하여 복제하는 것만큼 서열화 하는 것에 어려움을 갖게 되므로 식물학자들에게는 도전하는 자세를 갖게 한다.
DNA를 정제해야 하는데 이는 DNA를 제외한 RNA나 protein을 제거하는 과정이다. 마지막으로 남은 DNA sample을 농축하는 과정을 거친다. 4단계의 과정을 좀 더 자세히 알아보면 다음과 같다.
a. Bacterial cell 배양물의 증식 및 수확
37℃, LB 배지, 200 rpm shaking incubator에서 E. coli의 doubling time은 20분이고, maximum densi
gel electrophoresis)에 의한 유전자의 분리
a. Agarose gel 전기영동 시 DNA의 이동에 영향을 주는 요인들로는 DNA의 분자의 크기, Agarose의 농도, DNA 형태에 따라 이동속도가 다르다. 또 전압이 높을수록 전기장의 방향, Ethidium bromide, 전기영동 buffer의 성분과 이온의 강도도 전기영동 속도에 영향을 준다.
b. DNA loadi
유전자를 합성하는 재료가 되는 nucleotide.
⑷ Taq polymerase : 유전자 합성효소. 효소이지만 열에 강하다.
5. PCR 반응 각 성분에 대해 고려할 점
⑴ Template DNA
선택하여 증폭하고자 하는 target DNA 단편을 가리키는 용어로서 세포내의 chromosomal DNA나 전염성 병원체의 DNA 또는 RNA로부터 제조한 complementary DNA(cD