HGU
◇ Date: 20000. 00. 00 월요일
◇ Subject : DNAsub-cloning 1단계
◇ Principles
Plasmid: Bacterial cell 내에 염색체와는 독립적으로 존재하며 독자적으로 증식할 수 있는 Circular DNA로 세균의 생존에 필수적인 것은 아니다. Plasmid는 대부분 하나 이상의 유전자를 가지고, 이들 유전자는 종종 Host bacteria에 의해 나
DNAsub-cloning의 1단계: 원하는 유전자를 분리한다.
실험날짜 : 2011.10.24-28
실험목표 : DNA의 ligation/insertion process를 보고 그 결과를 확인한다. pET-14b vector에 antibiotic resistant 한 gene을 ligation 시키고, 후에 그 DNA를 component cell에 다시 삽입하여 ampicillin을 통해서 제대로 target gene이 삽입되었는지를 관찰하는 것
분자 전체의 0.01%에 불과하다. 게다가 10,000형질전환체는 수용세포 배양물에 존재하는 전체 세포 수의 매우 작은 비율이다. 따라서 플라스미드를 uptake한 세포를 구별해야 할 필요가 있다. 이를 위해 선별 마커(selectable marker)를 이용한다. Selectable marker란 비형질전환체(non-transformant)가 가지고 있지 않은 새
1. DNA를 자른다는 것은 nucleotide를 연결하고 있는 phosphodiester bond를 끊어여러 DNA 단편을 만들어 내는 것을 의미한다. 이 때, 이런 역할을 하는 효소를nuclease라고 하며 그 종류로는 바깥 쪽을 절단하는 효소인 exonuclease와 안쪽을 절단하는 endonuclease가 있다.
2. 대표적 endonuclease인 제한효소(restriction enzyme)는
◆실험 첫째날 2011년 10월 24일 월요일
▶원리
1 Restriction enzyme 처리
- 이 실험에서 우리는 아무 처리되지 않은 plasmid와 foreign gene을 plasmid에 삽입하여 만든 inserted plasmid에 각각 제한효소를 처리하는 실험을 했다.
- 제한효소란 DNA의 특정한 염기서열을 인식하고 인식부위 또는 그 근처의 특정 이중사