1. 제목( Subject ) : PlasmidDNApurification and 전기영동(Electrophoresis)
2. 실험목적(purpose)
미리 배양된 E.coli를 plasmidDNA를 purification 하고 이것을 Agarose Gel 전기영동을 통해 분리하여 확인한다.
3. 재료 및 기구 ( Material and Apparatus )
pippet, plasmidDNA, rack, pippet tip, centrifuge(미량원심분리기), 전기영동장치, comb, LB(
DNA와 같이 전기영동 될 때, DNA가 움직인 정도를 알 수 있게 하는 역할을 한다.
③ 전기영동 buffer
TAE (Tris-acetate EDTA):DNA분자량이 큰 경우, agarose electrophorsis 에서 쓴다.
TBE (Tris-borate EDTA):DNA분자량이 작은 경우, DNA sequencing에 쓰인다.
4. Materials & Equipments
Restriction enzymes(BamHⅠ, NdeⅠ), pET-14b plasmid, FabG gene
1. Object
제한효소 활용 및 Ligation, 전기영동, plasmid prep. 등의 여러 실험을 통해 Gene cloning의 전반적인 실험 및 이해를 하고, PCR의 기초적인 간단한 실험을 함으로써 DNA와 유전자를 다루는 molecular biology에서의 이론적 측면뿐만 아니라 실험적인 측면 또한 함양한다.
2. Date
실험기간: 2011년 11월 7일 –
◆실험 첫째날 2011년 10월 24일 월요일
▶원리
1 Restriction enzyme 처리
- 이 실험에서 우리는 아무 처리되지 않은 plasmid와 foreign gene을 plasmid에 삽입하여 만든 inserted plasmid에 각각 제한효소를 처리하는 실험을 했다.
- 제한효소란 DNA의 특정한 염기서열을 인식하고 인식부위 또는 그 근처의 특정 이중사
buffer는 gel이 살짝 잠길 정도로 붓는다.)
④ 2 µl의 100bp DNA ladder를 loading하여 DNA size marker로 사용한다.
⑤ 확인하고자 하는 plasmidDNA를 차례로 DNA loading buffer(1 µl)와 섞은 후, 각각의 well에 loading한다.
⑥ 75V 전압에서 전기영동을 하여, DNA가 충분히 분리되도록 한다. (Loading buffer의 이동위치 관찰)