DNA isolation
- plasmid를 GFP를 운반하기 위한 Vector로 사용하기 위해 plasmid DNA를 isolation하여 한다. plasmid DNA를 isolation하는 방법 중 alkaline method를 사용하였다.
세균에서 plasmid DNA를 추출하기 위한 방법은 배양된 세균을 centrifuge 한 후, Solution I, II, III를 넣어서 DNA를 분리 한다.
●Solution I
50mM Glucos ,25mM Tri
DNA 중합효소(DNA polymerase)는 Taq 1 polymerase이다. 초기에는 E. coli polymerase를 사용하였으나 열에 불안정하여 각 cycle이 진행될 때 마다 효소를 첨가해주어야 하는 불편함이 있었다. 그래서 개발된 것이 75℃ 온천에서 분리한 세균 고도호열균(Thermus aquaticus)에서 얻은 DNA polymerase이다. Taq 1 polymerase는 75℃에서 최
DNA형태(구조)에 따라 이동속도가 다르다. 일반적으로 supercoiled DNA가 가장 빨리, 그 다음 linear DNA, open circular DNA의 순으로 빠르게 이동한다.
d. 전압이 높을수록 이동속도가 빠르다.
e. 전기장의 방향도 이동 속도에 영향을 미친다.
f. Ethidium bromide는 DNA이동속도를 15%정도 감소시킨다.
g. 전기영동 buffer의
실험은 Cell line이나 초파리, Zebrafish 수준에서는 Gene targeting을 하는 데에는 높은 효율을 보여주었다. 한 연구에서는 사람에게서 severe combined immune deficiency (SCID)을 일으키는 IL2Rg gene의 결함을 cell line 수준에서 높은 효율로 정상 세포로 복구한다는 결과도 있었다. 또한 ZFN기술을 포유동물에 응용하기