2. Method
[실험재료]
premix, template & primer, D.W, mineral oil, thermocycler(PCR기계), Seakem LE agarose, gel caster, 1×TAE, EtBr, 마이크로피펫, 1.5㎖ tube
[실험방법]
① premix가 들어있는 20㎕ tube에 template DNA 1㎕, primer 2㎕를 D.W 17㎕를 넣고 잘 섞기 위해 vortexing 해준다.
② 적당하게 centrifuge 해준다.
- vortexing 시에 위로
. 이때 사용된 primer 1은 VEGER(Vascular endothelial growth factor)로 혈관내피성장촉진인자이다. 여기서 추론할 수 있듯이 HUVEC cell과 VEGER(Vascular endothelial growth factor)은 혈관내피세포와 관련이 있으므로 template와 관련있는 primer 일 것이며 이에 따라 RT-PCR 반응을 일으킬 것이다. 하지만 primer2는 α-SMA(smooth muscle acti
PCR의 첫 번째 단계는 DNA를 변성(Denaturation)시키는 것이다. 두 가닥의 DNA는 가열함으로써 분리시킬 수 있다. 분리된 각각의 DNA는 주형(Template)으로서 역할을 하게 된다. 변성 온도는 DNA 내에 있는 G+C의 양과 길이에 따라 달라진다. PCR의 두 번째 단계는 어닐링(Annealing)이다. 이 단계에서는 시발체(Primer)들이
primer 쌍을 이용하는 것이 바람직하다. 보통 30초가량 지속되는 이 단계에서 시발체의 5'→3'방향으로 DNA의 합성이 시작된다.
(3) DNA의 신장 (Elongation)
70°C ~ 74°C에서 시행하며 원하는 PCR산물의 크기가 크거나 반응요소의 농도가 낮을 때에는 시간을 연장시킬 수도 있다. Taq 중합효소는 보통 1분에