[분자생물학실험] PCR을 이용한 이중돌연변이의 제작 및 검증(Double mutant)

[분자생물학실험] PCR을 이용한 이중돌연변이의 제작 및 검증(Double mutant)-3

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레포트 > 자연계열
2011.02.18
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소개글

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목 차

1. 실험 목표 및 배경지식
실험 목표(PURPOSE)

배경지식
-PCR이란

2. 실험재료 및 실험방법
Materials

3. 결과

4.고찰

5.참고문헌

본문내용

산물은 점점 많이 존재하게 되므로 cycle 후반부에는 반응시간을 조금씩 늘려가는 것도 좋은 방법의 하나이며 마지막 cycle 에는 약 10분 정도 시간을 충분히 주어서 효소의 활성이 충분히 발휘되도록 한다.
2. 실험재료 및 실험방법
Materials
‣Lysis buffer
-50mM KCl -10mM Tris (pH 8.3)
-2.5mM MgCl2 -0.45% NP-40(IGEPAL)
-0.45 tween-20 -0.05% Gelatin
‣10x PCR Buffer
-100mM Tris -500mM KCl
-15mM MgCl2 (pH8.3)
‣dNTP mixture ‣primer
‣Taq polymerase ‣S medium
Method
1ml의 Smedium으로 plate의 worm을 모은다. 2회 정도 washing
20㎕의 lysis buffer를 넣고 pipeting
65℃에서 30min동안 incubation한다.
spin down한 후 상층액에서 3㎕만 취해 PCR tube에 넣는다.
PCR mixture제작
-10X PCR buffer 2㎕
-dNTP mix 2㎕
-primer each 1㎕

참고문헌

5.참고문헌
www.wormbase.org/

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