Amino Acid의 Titration과 pH buffer 작용
Amino Acid를 NaOH와 같은 염기로 Titration을 하여 얻어지는 Titration Curve는 적정하는 Amino Acid의 pH buffer 작용을 잘 설명해 준다.
즉 Amino Acid의 Carboxyl기는 Weak Acid이므로 NaOH-와 같은 Strong Base와 반응하면 일정한 pH 범위 내에서 큰 pH 변화를 일으키지 않는 pH Buffer 작용을 한다는
다. Amino Acid의 Titration과 pH buffer 작용
Amino Acid를 NaOH와 같은 염기로 Titration을 하여 얻어지는 Titration Curve는 적정하는 Amino Acid의 pH buffer 작용을 잘 설명해 준다.
즉 Amino Acid의 Carboxyl기는 Weak Acid이므로 NaOH-와 같은 Strong Base와 반응하면 일정한 pH 범위 내에서 큰 pH 변화를 일으키지 않는 pH Buffer 작용을 한
4. Bradford Assay
- Bradford Reagent는 95% ethanol, 88% phosphoric acid, Brilliant Blue G로 이루어져 있다. Ethanol은 유기용매이기 때문에 coomassie blue를 Bradford reagent 내에 잘 용해 시키고, phosphoric acid는 reagent가 산성 조건을 충족시키게 한다. 산성 조건 하에서 Coomassie blue는 doubly-protonated red form이 되기 때문에 6개의 phenyl grou
blotting은 분자생물학, 생화학, 면역학 등 여러가지 분야에 사용된다.
이와 비슷한 원리를 이용, DNA detection은 southernblotting을 이용하며, RNA detection은 northern blotting을 이용하고, post-translational modification을 detection은 eastern blotting을 사용한다.
1) Transfer of protein to membrane
Constant current (200mA)를 가하는 이
Nucleic Acid Hybridization Techniques
-------------------------------------
1. INTRODUCTION
* Southernblotting (DNA)와 northern blotting(RNA)의 원리
① nucleic acid 추출 → 제한효소 처리
② negative charge인 nucleic acid의 단편을 agarose gel 의 전기영동에 의해 크기로 분획
③ 분획된 RNA 또는 denatured DNA를 nitrocellulose 또는 nylon membrane에 고정
blotting : RNA detection
Southernblotting : DNA detection
Western blotting : protein detection
ASO hybridization
Allele specific oligonucleotide hybridization
Southernblotting의 한 방법
Dot hybridization
: 전체 DNA를 전기영동없이 이전 후 oligonucleotide probe 사용 결합
ASO hybridization
Point mutation까지도 검출할 수 있는 간단하고 간편한 방법
제한효소
DNA chip은 Southernblot(그림 1)이나 Nothern blot과 같이 혼성화(Hybridization) 원리를 사용한 것으로 1995년 미국의 스탠포드 대학에서 처음으로 발명되었다. 여기서 혼성화란 DNA 이중 나선이 A-T, G-C와 같이 코드가 특별하게 맞을 경우 달라붙는 성질을 말한다. Southernblot이 니트로 셀룰로오스 막(Nitro cellulose membrane
Southern & Northern blot 해석
Agarose gel로부터 DNA fragment를 자른다.
2. 1.5ml microcentrifuge tube 에 gel slice를 넣어 무게를 재고 QG buffer를 gel 무게의 3배만큼 첨가.
3. 50도에서 10min incubate, incubation 동안 매 2~3분마다 vortexing 하면서 mix
4. Sample에 gel volume의 동령으로 iso-propanol 첨가 & mix
5. QiAquick column에 sample를 넣
1. 제목 : 단백질 정량 분석 – BCA법 & SDS-PAGE 분석 & Western Blot
2. 실험 목적
: BCA Method를 이용하여 우유 중의 단백질 함량을 분석하고 SDS-PAGE와 Coomassie Blue 염색을 통해 단백질의 전기영동 결과를 관찰한 것을 바탕으로 Western Blot을 시행하여 membrane에 transfer시켜, 항원-항체 반응을 이용하여 특정한 단
일반생물학및실험 Report 2020 November 01
생물학 실험 Report
의생명공학과
Ⅰ. 기본정보
실험 제목: DNA Gel electrophoresis
실험 목적: 플라스미드 DNA와 PCR 생산물을 전기영동을 통해 확인하는 실험
실험자: antler11
Ⅱ. 서론 (Introduction)
1. PCR (polymerase chain reaction)
PCR(polymerase chain reaction)은 1983년, K.B.Mullis가 고